Ключевая разница – гибридизация in situ и иммуногистохимия
Диагностика рака и инфекционных заболеваний является популярной тенденцией, когда новые методы, основанные на протеомике и геномике, используются с целью идентификации опухолей или инфекционных клеток, их пролиферации и мест развития клеток, а также для анализа генетической основы большинства инфекционных и незаразная болезнь. Это приведет к точной обработке и разработке лекарств, а также к разработке индивидуальных методов лечения заболеваний. Гибридизация in situ (ISH) и иммуногистохимия (IHC) являются двумя широко используемыми методами в биологии рака, и ключевое различие между гибридизацией in situ и иммунохимией заключается в молекулах, которые используются в процедуре анализа. В ISH в анализе используются зонды нуклеиновых кислот, тогда как в IHC моноклональные и поликлональные антитела используются для диагностических определений.
Что такое гибридизация на месте (ISH)?
Гибридизация in situ представляет собой метод гибридизации нуклеиновых кислот, который проводится непосредственно на участке или срезе ткани, во всей ткани или в клетках. Этот метод основан на теории комплементарного спаривания оснований Уотсона Крика, что приводит либо к гибридам ДНК-ДНК, либо к гибридам ДНК-РНК, которые могут обнаруживать мутировавшие гены или идентифицировать требуемый интересующий ген. Последовательности одноцепочечной ДНК, последовательности двухцепочечной ДНК, последовательности одноцепочечной РНК или синтетические олигонуклеотидные последовательности используют в качестве зондов во время метода гибридизации, и эти зонды метят радиоактивным фосфором на своем 5'-конце для процедур идентификации при авторадиографии или метят с использованием флуоресцентных красителей.. Доступны различные типы методов ISH в зависимости от типа используемого датчика и типа используемой техники визуализации.
Рисунок 01: Гибридизация флуоресцентных ламп in situ
Существует множество применений ISH, в основном в молекулярной диагностике инфекционных заболеваний для выявления наличия патогенов и подтверждения патогена с помощью молекулярной диагностики. Он также используется в области биологии развития, кариотипирования и филогенетического анализа и физического картирования хромосом.
Что такое иммуногистохимия (ИГХ)?
В методе ИГХ основной анализируемой молекулой является антиген. Во время IHC моноклональные и поликлональные антитела используются для определения наличия антигенов при инфекции или статусе пролиферации злокачественных клеток. Этот метод основан на связывании антиген-антитело, и для этого метода используются ферментные метки; одним из таких приложений является ELISA (иммуноферментный анализ). Маркеры также могут представлять собой антитела с флуоресцентной меткой или антитела с радиоактивной меткой.
Рис. 02. Иммуногистохимия
IHC широко используется для обнаружения раковых клеток. Диагностические процедуры нацелены на антигены, присутствующие на опухолевых клетках, для идентификации и характеристики опухоли. Та же процедура используется для диагностики инфекционных агентов. Моноклональные и поликлональные антитела также используются для анализа различных генных продуктов, обеспечивая реакцию связывания антитело-антиген между желаемым белком и вводимым синтетическим антителом.
Каковы сходства между гибридизацией in situ и иммуногистохимией?
- ISH и IHC являются высокоспецифичными реакциями.
- Оба метода очень точны.
- Оба метода могут быть использованы в диагностике онкологических и инфекционных заболеваний.
- Эти методы выполняются в стерильных лабораторных условиях.
- Оба являются быстрыми методами, дающими воспроизводимые результаты.
- ISH и IHC используют такие методы обнаружения, как радиомечение и методы флуоресценции.
В чем разница между гибридизацией in situ и иммуногистохимией?
Гибридизация in situ и иммуногистохимия |
|
| ISH - это метод гибридизации нуклеиновых кислот, который непосредственно применяется к части или срезу ткани или ко всей ткани. | ИГХ – это метод, при котором моноклональные и поликлональные антитела используются для определения наличия антигенов, представляющих собой специальные белковые маркеры, размещенные на поверхности клеток. |
| Тип анализируемых биомолекул | |
| ISH анализирует нуклеиновые кислоты. | ИГХ анализирует белки-антигены. |
| Основы биохимической реакции | |
| В этом методе происходит комплементарное спаривание оснований между ДНК-ДНК или ДНК-РНК. | Взаимодействия антиген-антитело участвуют в иммуногистохимии. |
| Ферментсвязанные методы обнаружения | |
| Методы обнаружения, связанные с ферментами, нельзя использовать в ISH. | Методы обнаружения, связанные с ферментами, могут использоваться в IHC. |
Резюме – гибридизация in situ и иммуногистохимия
Молекулярная диагностика - это быстрые и подтверждающие методы, которые можно использовать для выявления неинфекционных заболеваний, таких как рак, или инфекционных заболеваний, таких как ВИЧ или туберкулез, на основе молекулярных маркеров, присутствующих в клетках, которые приводят к проявлению заболевания.. Молекулярные маркеры могут присутствовать в форме экспрессированных белков или на генетическом уровне, на основе которых вводятся различные новые методы для повышения эффективности и менее трудоемки, хотя эти методы связаны с высокой стоимостью. Таким образом, ISH зависит от образования гибридов ДНК-ДНК или ДНК-РНК, а IHC зависит от специфических реакций между антителом и антигеном. В этом разница между гибридизацией in situ.
Загрузить PDF-версию гибридизации in situ и иммуногистохимии
Вы можете загрузить PDF-версию этой статьи и использовать ее в автономном режиме в соответствии с примечанием к цитированию. Пожалуйста, загрузите PDF-версию здесь. Разница между гибридизацией in situ и иммуногистохимией.
