Ключевая разница – иммунофлуоресценция и иммуногистохимия
Диагностика заболеваний с использованием молекулярно-биологических методов стала новой областью клинико-лабораторных технологий. Он включает в себя все тесты и методы для выявления заболевания и понимания причины заболевания путем анализа ДНК, РНК или экспрессированных белков в организме. Быстрые успехи в молекулярной диагностике позволили проводить фундаментальные исследования инфекционных и неинфекционных заболеваний. Они используются для определения изменений в последовательности или уровнях экспрессии в ключевых генах или белках, участвующих в заболевании. Иммунофлуоресценция (ИФ) и иммуногистохимия (ИГХ) являются двумя широко используемыми методами в биологии рака. IF представляет собой тип ИГХ, в котором метод флуоресцентного обнаружения используется для анализа моноклональных и поликлональных антител, тогда как ИГХ использует химические методы для обнаружения моноклональных и поликлональных антител. В этом ключевое различие между IF и IHC.
Что такое иммунофлуоресценция (ИФ)?
Иммунофлуоресценция - это метод обнаружения, при котором антитела, используемые в анализе, метятся с использованием флуоресцентных красителей или флуоресцентных белков для целей обнаружения. Меченые вторичные антитела могут давать нежелательные фоновые сигналы; поэтому метод IF основан на мечении самого первичного антитела в настоящее время, чтобы избежать нежелательных сигналов во время обнаружения. С помощью этого метода предотвращается неспецифическое связывание между первичным и вторичным антителом, и оно происходит быстрее, поскольку не требуется вторичной стадии инкубации. Качество данных также улучшено.
Рисунок 01: Двойное иммунофлуоресцентное окрашивание на BrdU, NeuN и GFAP
Флуорохромы или флуоресцентные красители представляют собой соединения, которые могут поглощать излучение, предпочтительно ультрафиолетовое излучение, которое возбуждается. Когда частицы достигают основного состояния из возбужденного состояния, они испускают излучение, которое улавливается и регистрируется детектором для формирования спектра. Очень важно, чтобы флуоресцентная метка была совместима и стабильна для конкретной реакции, и она должна быть правильно конъюгирована с антителом для получения точных результатов. Одним из наиболее часто используемых флуорохромов является изотиоцианат флуоресцеина (FITC), который имеет зеленый цвет с пиками поглощения и испускания при длинах волн 490 нм и 520 нм соответственно. Родамин, другой агент, используемый при IF, имеет красный цвет и имеет отчетливые пики поглощения и излучения с длинами волн 553 нм и 627 нм.
Что такое иммуногистохимия (ИГХ)?
IHC - это метод молекулярного тестирования, применяемый для идентификации и подтверждения присутствия антигена в клетке-мишени. Клеткой-мишенью может быть инфекционная частица, микробный патоген или клетка злокачественной опухоли. IHC использует моноклональные и поликлональные антитела для определения присутствия антигенов, присутствующих на клеточной поверхности клеток-мишеней. Метод основан на связывании антиген-антитело. Маркер обнаружения конъюгирован с этими антителами для обнаружения присутствия или отсутствия конкретного антигена. Эти маркеры могут быть химическими маркерами, такими как ферменты, антитела с флуоресцентной меткой или антитела с радиоактивной меткой.
Рисунок 02: Срез мозга мыши, окрашенный с помощью иммуногистохимии
Наиболее популярным применением ИГХ является биология раковых клеток для выявления наличия злокачественных опухолей, но он также используется для обнаружения инфекционных заболеваний.
Каковы сходства между иммунофлуоресценцией и иммуногистохимией?
- Иммунофлюоресценция и иммуногистохимия проводятся в условиях in vitro.
- Оба метода основаны на антиген-антитело
- Оба метода очень быстрые.
- Результаты методик воспроизводимы.
- У обоих улучшено качество данных.
- Эти методики используются в диагностике онкологических и инфекционных заболеваний.
В чем разница между иммунофлуоресценцией и иммуногистохимией?
Иммунофлюоресценция и иммуногистохимия |
|
| IF - это метод обнаружения, при котором антитела, используемые в анализе, метятся с использованием флуоресцентных красителей или флуоресцентных белков для обнаружения. | IHC - это метод обнаружения, при котором антитела, используемые в анализе, метят с использованием химических веществ или радиоактивных элементов для обнаружения. |
| Точность | |
| Точность метода IF выше по сравнению с IHC. | Точность ниже в IHC. |
| Специфика | |
| IF более конкретен. | IHC менее конкретен. |
Резюме – Иммунофлуоресценция и иммуногистохимия
Молекулярные механизмы привели к многочисленным изменениям в области медицины, породив передовые методы молекулярного тестирования, которые произвели революцию в области диагностики. Эти изобретения привели к быстрой и точной идентификации и подтверждению болезни, что позволило успешно вводить и производить лекарства. Эти методы также используются в фармакологии, чтобы найти мишени лекарств и подтвердить фармакокинетические свойства лекарства в процессе метаболизма лекарства. IF и IHC представляют собой два диагностических метода, основанных на концепции связывания антигена и антитела, хотя способ обнаружения в обоих методах различается. IF использует принцип флуоресценции для обнаружения антигена, а IHC использует концепцию химической конъюгации для обнаружения антигена. В этом разница между IF и IHC.
Загрузить PDF-версию иммунофлуоресценции и иммуногистохимии
Вы можете загрузить PDF-версию этой статьи и использовать ее в автономном режиме в соответствии с примечанием к цитированию. Пожалуйста, загрузите PDF-версию здесь. Разница между иммунофлуоресценцией и иммуногистохимией.
