Основное различие между прямой и непрямой иммунофлуоресценцией заключается в том, что при прямой иммунофлюоресценции используется одно антитело, которое работает против интересующей мишени, в то время как при непрямой иммунофлюоресценции используются два антитела для маркировки интересующей мишени.
Иммунофлуоресценция или визуализация клеток - это метод, который используется для мечения определенного антигена-мишени флуорофором. Здесь флуорофор представляет собой флуоресцентное химическое соединение, которое может повторно излучать свет при возбуждении светом. Когда флуорофор связывается с антигеном-мишенью, он позволяет обнаружить молекулу-мишень в образце. Чтобы описать это далее, когда антиген связывается со специфическим антителом, он может быть конъюгирован с флуорофорами. Следовательно, присутствие целевого антигена в образце легко обнаружить при наблюдении под флуоресцентным микроскопом.
Кроме того, существует два типа иммунофлуоресценции; прямой и непрямой иммунофлуоресценции. Разница между прямой и непрямой иммунофлуоресценцией в основном заключается в количестве используемых антител и конъюгации флуорофора. То есть при прямой иммунофлуоресценции флуорофор напрямую конъюгируется с первичным антителом, а при непрямой иммунофлуоресценции флуорофор конъюгируется со вторичным антителом.
Что такое прямая иммунофлуоресценция?
Иммунофлуоресценция использует антитела для обнаружения специфических антигенов-мишеней. Прямая иммунофлюоресценция является одним из двух типов иммунофлюоресценции. В прямой иммунофлуоресценции участвует одно антитело (первичное антитело), и флуорофор напрямую конъюгирует с первичным антителом. При связывании антитела с антигеном-мишенью флуорофор испускает флуоресценцию, которую можно обнаружить с помощью флуоресцентного микроскопа.
Рисунок 01: Прямая иммунофлуоресценция
Однако прямая иммунофлуоресценция является дорогостоящим методом, поскольку первичные конъюгированные антитела дороже вторичных антител. Тем не менее, он не требует дополнительного шага, следовательно, более короткий метод. Кроме того, неспецифические связывания снижаются при прямой иммунофлуоресценции. Следовательно, перекрестная реактивность видов низкая. Но при обнаружении чувствительность прямой иммунофлуоресценции слабее по сравнению с непрямой иммунофлюоресценцией.
Что такое непрямая иммунофлуоресценция?
Непрямая иммунофлуоресценция - это второй тип иммунофлуоресценции, который включает два типа антител, таких как первичные и вторичные антитела, при мечении целевого антигена. В этом методе флуорофор конъюгирует со вторичным антителом. Следовательно, этот метод включает в себя дополнительный шаг.
Рисунок 02: Иммунофлуоресценция
Однако чувствительность этого метода высока, так как несколько флуорофоров могут быть конъюгированы со вторичными антителами, что облегчает обнаружение. Кроме того, непрямая иммунофлуоресценция менее затратна из-за того, что конъюгация вторичных антител дешевле и проще. По сравнению с прямой иммунофлуоресценцией перекрестная реактивность видов при непрямом методе выше.
Каковы сходства между прямой и непрямой иммунофлуоресценцией?
- Это два типа метода иммунофлуоресценции.
- Первичные антитела и флуорофор используются в обоих методах.
- Также в обоих методах происходит реакция антиген-антитело.
- Кроме того, как прямая, так и непрямая иммунофлуоресценция используют флуоресцентный микроскоп для обнаружения антигена.
В чем разница между прямой и непрямой иммунофлуоресценцией?
Иммунофлуоресценция может быть прямой или непрямой на основе конъюгации флуорофора с используемыми антителами. При прямой иммунофлуоресценции флуорофор конъюгирует с первичным антителом, которое является единственным антителом, используемым в этом методе. В отличие от этого, при непрямой иммунофлуоресценции флуорофор конъюгирует со вторичным антителом, которое является одним из двух типов антител, используемых в методике. Следовательно, основное различие между прямой и непрямой иммунофлуоресценцией заключается в типе антител, которые конъюгируют с флуорофором.
Следующая инфографика дает параллельное сравнение различий между прямой и непрямой иммунофлуоресценцией.
Резюме – Прямая и непрямая иммунофлуоресценция
Иммунофлуоресценция - это метод, который используется для обнаружения присутствия специфических антигенов в образце. В этом методе используются специфические антитела. Поэтому при этом антитела конъюгируют с флуорофорами для их обнаружения с помощью флуоресцентного микроскопа. Кроме того, существует два типа иммунофлуоресценции, а именно: прямая и непрямая иммунофлуоресценция. Прямая иммунофлуоресценция включает одно антитело и флуорофор, непосредственно конъюгированный с этим антителом. Непрямая иммунофлуоресценция включает два антитела; первичные и вторичные и флуорофор, конъюгированный со вторичными антителами. Поскольку несколько вторичных антител могут связываться с первичным антителом, а несколько флуорофоров могут конъюгировать со вторичными антителами, метод непрямой иммунофлюоресценции является более чувствительным, чем прямой метод. Кроме того, непрямой метод дешевле, чем прямой. Таким образом, в этом разница между прямой и непрямой иммунофлуоресценцией.
