Ключевое различие FPLC и ВЭЖХ заключается в том, что FPLC - это тип жидкостной хроматографии, который очищает большие биомолекулы, такие как белки, нуклеотиды и пептиды, в то время как HPLC - это тип жидкостной хроматографии, который разделяет соединения с небольшой молекулярной массой.
Жидкостная хроматография – это метод, используемый для разделения образца на отдельные компоненты. Это разделение происходит за счет взаимодействия конкретных образцов с подвижной и неподвижной фазами. Компоненты в образце разделяются на основе сродства каждого компонента к подвижной фазе в жидкостной хроматографии. Когда подвижная фаза и образец проходят через колонку, компоненты образца начинают разделяться на полосы, которые можно обнаружить с помощью УФ-видимой спектроскопии. Следовательно, FPLC и HPLC представляют собой два типа методов жидкостной хроматографии.
Что такое FPLC?
FPLC - это тип жидкостной хроматографии, который очищает большие биомолекулы, такие как белки, нуклеотиды и пептиды. Быстрая жидкостная хроматография белков (FPLC) была впервые разработана и выпущена на рынок в Швеции компанией Pharmacia в 1982 году. Она часто используется для анализа или очистки белковых смесей. Это происходит по принципу сродства компонентов образца к движущейся жидкости (подвижная фаза) и пористому твердому материалу (неподвижная фаза). В FPLC подвижная фаза представляет собой буфер, а стационарная фаза представляет собой смолу, состоящую из шариков. Обычно он состоит из сшитой агарозы, упакованной в цилиндрическую стеклянную или пластиковую колонку.
Рисунок 01: Аппарат FLPC (быстрая белковая жидкостная хроматография)
В большинстве стратегий FLPC используется ионообменная смола. Следовательно, интересующий белок будет связываться со смолой за счет взаимодействия зарядов. Метод FLPC также использует два буфера: буфер 1 (рабочий буфер) и буфер 2 (буфер для элюции). Первоначально, когда через колонку пропускают смесь буфера и образца, интересующий белок в смеси будет связываться со смолой за счет взаимодействия зарядов. Но интересующий белок диссоциирует и возвращается в раствор в элюирующем буфере, когда элюирующий буфер проходит через колонку в конце процесса. Позже раствор (элюант, содержащий интересующий белок) проходит через два детектора, которые измеряют концентрацию соли и концентрацию белка. Когда каждый белок элюируется, он появляется в виде «пика» во время обнаружения и может быть собран для дальнейшего использования.
Что такое ВЭЖХ?
ВЭЖХ - это разновидность жидкостной хроматографии, которая разделяет соединения с малой молекулярной массой. В 1969 г. первая ВЭЖХ была произведена компанией Waters Corporation, США. В высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) смесь образца (аналит) в растворителе (подвижная фаза) прокачивается через колонку с хроматографическим наполнителем (неподвижная фаза) под высоким давлением. Смесь проб переносится движущимся потоком газа-носителя гелия или азота.
Рисунок 02: ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография)
Компоненты в смеси образцов, которые имеют наименьшее количество взаимодействия с неподвижной фазой или наибольшее взаимодействие с подвижной фазой, быстрее покидают колонку. С другой стороны, компоненты в смеси проб, которые в наибольшей степени взаимодействуют с неподвижной фазой или в наименьшей степени взаимодействуют с подвижной фазой, будут выходить из колонки медленнее. Основываясь на указанном выше принципе взаимодействия, можно разделить компоненты пробной смеси. Более того, приборный детектор идентифицирует каждый компонент пробной смеси, выходящий из колонки. ВЭЖХ используется для проверки экологических и биологических образцов на наличие или отсутствие известных соединений, таких как наркотики, токсины или пестициды. Он используется в различных отраслях промышленности, таких как фармацевтика, охрана окружающей среды, судебная экспертиза и химическая промышленность.
Каковы сходства между FPLC и HPLC?
- FPLC и HPLC являются типами жидкостной хроматографии.
- Оба используются для разделения и идентификации биологических образцов.
- Они имеют жидкую подвижную фазу и твердую неподвижную фазу.
- В обоих методах для прохода через образец используется колонка.
- В этих методах используются насосы, детекторы, клапаны и программное обеспечение для разделения и обнаружения проб.
В чем разница между FPLC и HPLC?
FPLC - это тип жидкостной хроматографии, который используется для очистки больших биомолекул, таких как белки, нуклеотиды и пептиды. ВЭЖХ - это тип жидкостной хроматографии, который используется для разделения низкомолекулярных соединений. Итак, в этом ключевое различие между FPLC и HPLC. Кроме того, FPLC использует мониторы pH и электропроводности, а также коллекторы фракций. Напротив, ВЭЖХ не использует мониторы pH и электропроводности и коллекторы фракций.
Приведенная ниже инфографика перечисляет больше различий между FPLC и HPLC в табличной форме.
Резюме – FPLC против HPLC
Хроматография – это лабораторный аналитический метод, используемый для разделения компонентов смеси. Он делится на несколько типов, таких как колоночная хроматография, газовая хроматография, жидкостная хроматография, ионообменная хроматография и т. Д. FPLC и HPLC представляют собой два типа методов жидкостной хроматографии. FPLC - это тип жидкостной хроматографии, который используется для очистки больших биомолекул, таких как белки, нуклеотиды и пептиды. С другой стороны, ВЭЖХ - это разновидность жидкостной хроматографии, которая используется для разделения соединений с малой молекулярной массой. Таким образом, это краткое изложение того, в чем разница между FPLC и HPLC.
