Ключевая разница - страница SDS и вестерн-блот
Вестерн-блоттинг - это метод, который обнаруживает определенный белок в образце белка. Этот метод выполняется в несколько ключевых этапов: гель-электрофорез, блоттинг и гибридизация. Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS Page) представляет собой разновидность метода гель-электрофореза, который используется для разделения белков в соответствии с их размерами (молекулярными массами). Вестерн-блоттинг представляет собой специальный лист блоттинговой мембраны, который используется для переноса той же структуры белков в SDS Page. Ключевое различие между SDS-страницей и вестерн-блоттингом заключается в том, что SDS-страница позволяет разделять белки в смеси, тогда как вестерн-блоттинг позволяет обнаруживать и количественно определять конкретный белок из смеси. Оба они полезны в исследованиях белкового анализа.
Что такое страница SDS?
SDS Page - это метод гель-электрофореза, используемый для разделения белков. Он широко используется в биохимии, генетике, судебной экспертизе и молекулярной биологии. После извлечения белков из образца их помещают в гель, состоящий из SDS и полиакриламида. SDS представляет собой анионный детергент, который используется для линеаризации белков (денатурации белков) и для придания линеаризованным белкам отрицательного заряда, пропорционального их молекулярной массе. Полиакриламид становится твердой подложкой для геля. Отрицательно заряженные денатурированные белки мигрируют через гель к положительному концу аппарата. В зависимости от размеров белков скорость миграции белков различается, и происходит разделение. Поэтому страница SDS полезна для разделения отдельных белков по их размерам.
Приготовление полиакриламидного геля для фракционирования белков является важным этапом в SDS Page. Правильная концентрация полиакриламида и тип используемого сшивающего агента сильно влияют на физические свойства геля, что делает фактическим разделение различных белков. Размеры пор геля должны быть правильно подобраны для эффективного разделения. Тем не менее, SDS Page считается методом разделения белков с высоким разрешением.
Техника SDS Page имеет серьезные ограничения при анализе белков. Поскольку SDS денатурирует белки перед разделением, он не позволяет определять ферментативную активность, взаимодействия белков, кофакторы белков и т. д.
Рисунок 01: Страница паспорта безопасности
Что такое вестерн-блоттинг?
Техника вестерн-блоттинга позволяет обнаруживать определенный белок из белковой смеси и измерять количество и молекулярную массу белка. Вестерн-блоттинг представляет собой мембрану, используемую во время процедуры блоттинга для получения зеркального отображения структуры белков в SDS-полиакриламидном геле. Мембрана, используемая для вестерн-блоттинга, в основном состоит из нитроцеллюлозы или поливинилидендифторида (ПВДФ). Мембрану с перенесенным белком можно использовать для идентификации желаемого белка. Требуются высококачественные антитела для обнаружения желаемого белка путем гибридизации. Антитело связывается со своим специфическим антигеном и выявляет присутствие желаемого антигена, который является белком.
Перенос белков из SDS-полиакриламидного геля на вестерн-блоттинг осуществляют с помощью электроблоттинга. Это эффективный и быстрый метод, который вызывает электрофорез белков из геля и переход на нитроцеллюлозную мембрану (вестерн-блоттинг).
Рисунок 02: Вестерн-блот
В чем разница между SDS Page и Western Blot?
Страница SDS против вестерн-блоттинга |
|
| SDS Page – метод гель-электрофореза. | Вестерн-блоттинг - это метод, который применяется на мембране для обнаружения определенного белка в смеси. |
| Использовать | |
| Страница SDS позволяет разделить белки по их размерам. | Вестерн-блоттинг позволяет переносить белки на гель для ПААГ без изменения его структуры и позволяет проводить гибридизацию со специфическими антителами. |
| Недостатки | |
| Денатурация белков, высокая стоимость и присутствие нейротоксинов являются недостатками этого метода. | Эта техника требует много времени и требует хорошего личного опыта и определенных контролируемых условий. |
Резюме – Страница SDS против вестерн-блоттинга
страница SDS и вестерн-блот – два метода, применяемые в анализе белков. SDS Page позволяет легко разделить белки на геле в соответствии с их молекулярной массой. Вестерн-блот помогает подтвердить наличие и количество определенного белка путем гибридизации со специфическими антителами. В этом разница между SDS Page и вестерн-блоттингом.
