Ключевая разница - страница SDS и нативная страница
SDS и нативная страница - это два типа методов электрофореза в полиакриламидном геле, используемых в молекулярной биологии. Основное различие между SDS Page и Native Page заключается в типе используемого полиакриламидного геля. В SDS Page используется денатурирующий гель, поэтому молекулы разделяются на основе их молекулярной массы. Напротив, в Native Page используются неденатурирующие гели. Таким образом, молекулы разделяются по их размеру, заряду и форме.
Электрофорез в полиакриламидном геле (Page) использует гель, полученный путем полимеризации мономеров акриламида с метиленбисакриламидом. Полиакриламид более прочен и термостабилен, чем агароза. Полиакриламидные гели имеют меньший размер пор, что позволяет эффективно разделять белки. Существует два основных типа настроек страницы, а именно страница SDS и собственная страница. SDS Page или электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия разделяет белки на основе их молекулярной массы. Денатурирующие гели используются в SDS Page. Native Page использует неденатурирующие гели и разделяет белки по их размеру, заряду и форме (трехмерная конформация).
Что такое страница SDS?
SDS Page является наиболее распространенным методом электрофореза, используемым для разделения белков на основе их молекулярной массы. Гель производится путем добавления SDS (додецилсульфата натрия), который является моющим средством. SDS превращает белки зубных протезов в мономеры. SDS является анионным моющим средством. Следовательно, он добавляет чистый отрицательный заряд белкам в широком диапазоне pH. Когда суммарный отрицательный заряд передается белковым молекулам, из-за изменения заряда сложные структуры разрушаются. Из-за отрицательного заряда белки притягиваются к положительному концу. Таким образом, молекулы с более низкой молекулярной массой быстрее перемещаются по гелевой матрице и могут наблюдаться вблизи анода, тогда как белки с более высокой молекулярной массой наблюдаются ближе к лункам.
Рисунок 01: Страница паспорта безопасности
Связывание SDS с полипептидной цепью пропорционально его относительной молекулярной массе. Следовательно, молекулярную массу также можно определить с помощью SDS Page. Окрашивание гелей SDS Page проводят окрашиванием бромфеноловым синим. Область применения SDS page в большей степени зависит от того, где его можно использовать для оценки относительной молекулярной массы и определения относительного содержания белков в белковой смеси. SDS Page также можно использовать для определения распределения белков в смеси белков. SDS Page также применяется для очистки и оценки белков. Он используется в качестве предварительной процедуры вестерн-блоттинга и гибридизации, которая, в свою очередь, используется для картирования и идентификации белков.
Что такое нативная страница?
Native Электрофорез в полиакриламидном геле (Native Page) использует неденатурирующий гель. Поэтому SDS или любой другой денатурирующий агент не добавляют в гелевую матрицу. В Native Page разделение белков основано на заряде и размере белка. Следовательно, подвижность белка зависит от заряда и размера белка.
Заряд белка зависит от боковых цепей аминокислот. Если боковые цепи заряжены отрицательно, белок получит общий отрицательный заряд, и наоборот. Белки сохраняют трехмерную конформацию благодаря происходящему сворачиванию. Сворачивание возникает в результате нескольких типов связей в белках, таких как дисульфидные связи, гидрофобные взаимодействия и водородные связи. Следовательно, если нативный ПАГ находится при нейтральном pH, белки будут разделены в соответствии с молекулярной формой белка. Таким образом, Native Page можно использовать в качестве чувствительного метода для обнаружения изменения заряда или конформации белка.
Основное преимущество нативного Пейджа заключается в том, что белок, используемый для Пейдж-анализа, может быть восстановлен в исходном состоянии после Пейдж-анализа, так как белок не нарушается во время процесса. Native Page - это метод с относительно высокой пропускной способностью, а стабильность белка повышается.
Рисунок 02: Родная страница
По завершении обработки геля гель Native Page можно осмотреть путем окрашивания бромфеноловым синим или любым другим подходящим реагентом для окрашивания. Применение Native Page включает разделение кислых белков, включая гликопротеины, такие как человеческий рекомбинантный эритропоэтин, или идентификацию белков, присутствующих в альбумине бычьей сыворотки (BSA).
Каковы сходства между страницей SDS и нативной страницей?
- В системах SDS Page и Native Page используется полиакриламидный гель в качестве матрицы геля.
- Оба используются для разделения и идентификации белков.
- Оба используют электрофоретическую подвижность для разделения соединений.
- И то, и другое может быть выполнено как вертикально, так и горизонтально (в основном выполняется как вертикальная установка страницы, потому что длина тиража больше).
- Аппарат для электрофореза, включая емкость с гелем, гребни и блок питания, необходим для работы обоих методов.
- Визуализация геля может быть выполнена методами окрашивания в обеих техниках.
В чем разница между страницей SDS и нативной страницей?
Страница SDS и нативная страница |
|
| SDS Page или додецилсульфат натрия Page разделяет белки по их молекулярной массе и использует денатурирующий гель. | Native Page использует неденатурирующие гели и разделяет белки по их размеру, заряду и форме (трехмерная конформация). |
| Тип геля | |
| В паспорте безопасности используется денатурирующий гель. | На нативной странице используется неденатурирующий гель. |
| Наличие паспорта безопасности | |
| SDS присутствует в качестве моющего средства для придания отрицательного заряда образцу на странице SDS. | SDS отсутствует на нативной странице. |
| Основание разделения | |
| Разделение белков зависит от молекулярной массы белка на странице SDS. | Разделение зависит от размера и формы молекулы белка на нативной странице. |
| Стабильность белка | |
| Стабильность белка низкая на странице SDS. | Стабильность белка на нативной странице высокая. |
| Восстановление исходного белка | |
| Невозможно, так как он денатурирован на странице паспорта безопасности. | Возможно на нативной странице. |
Резюме – Страница SDS и нативная страница
SDS Page и Native Page - это два типа методов электрофореза в полиакриламидном геле, используемых для разделения белков. SDS Page обрабатывается моющим средством под названием SDS. SDS придает белку общий отрицательный заряд, что затем приводит к денатурации белка. Поэтому белки разделяют на основе их молекулярной массы. Напротив, метод Native Page не использует никаких денатурирующих агентов. Таким образом, белки разделяются либо по размеру, либо по форме. В этом разница между страницей SDS и нативной страницей.
