Ключевое различие между ВЭЖХ с обращенной фазой и HIC заключается в том, что в ВЭЖХ с обращенной фазой используется более полярная подвижная фаза и менее полярная стационарная фаза. Принимая во внимание, что HIC использует гидрофобную стационарную фазу, которая позволяет гидрофобным молекулам присоединяться к ней.
Хроматография – это аналитический метод, который помогает разделить смесь на компоненты. Во-первых, мы должны растворить образец, который нужно разделить, в раствор. Эта смесь раствор-вещество называется подвижной фазой. Затем подвижная фаза проходит через другой материал, называемый неподвижной фазой. Неподвижная фаза определяет разделение компонентов. Разделение происходит за счет разделения материала между подвижной и неподвижной фазами.
Что такое ОФ ВЭЖХ?
Термин RP HPLC расшифровывается как высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой. Он предполагает разделение компонентов в смеси по гидрофобности. Гидрофобные компоненты в подвижной фазе связываются с иммобилизованными гидрофобными лигандами на неподвижной фазе, тогда как гидрофильные компоненты элюируют через неподвижную фазу, не прикрепляясь к поверхности неподвижной фазы.
Рисунок 01: Аппарат ВЭЖХ
Кроме того, этот метод обладает большей воспроизводимостью по сравнению с другими хроматографическими методами, а также демонстрирует широкую применимость. Поэтому мы используем этот метод в лабораториях для более чем 75% всех методов ВЭЖХ. В большинстве случаев мы используем водную смесь воды с смешиваемым полярным органическим растворителем в качестве подвижной фазы. Таким образом, он обеспечит прикрепление гидрофобных компонентов раствора к поверхности неподвижной фазы.
Что такое HIC?
Термин HIC расшифровывается как Hydrophobic Interaction Chromatography. Это тип ВЭЖХ с обращенной фазой, и этот метод используется в основном для разделения больших биомолекул, таких как белки. В этом методе нам нужно использовать водную среду, чтобы сделать образец биомолекулы. Это связано с тем, что органические растворители могут вызывать денатурацию белков. Кроме того, в этой методике используется взаимодействие крупных молекул со слегка гидрофобной поверхностью неподвижной фазы. Кроме того, мы должны использовать высокую концентрацию соли в образце, потому что это способствует сохранению белка на упаковке; этот процесс называется высаливанием. Постепенно уменьшая концентрацию соли, мы можем заставить биомолекулы элюироваться отдельно в соответствии с их гидрофобностью.
Обычно в этом методе используются условия, противоположные условиям ионообменной хроматографии. В этом методе сначала нам нужно пропустить через колонку буферный раствор, чтобы уменьшить сольватацию растворенного вещества в образце. Это заставляет гидрофобные области белка подвергаться воздействию. Однако, когда молекула более гидрофобна, для ускорения связывания требуется меньше соли. Здесь менее гидрофобные растворенные вещества элюируются первыми, а в соответствии с изменением концентрации соли более гидрофобные растворенные вещества элюируются последними.
В чем разница между ОФ ВЭЖХ и HIC?
Хроматография – это аналитический метод разделения компонентов в смеси. ВЭЖХ с обращенной фазой и HIC представляют собой два специализированных хроматографических метода. Основное различие между ВЭЖХ с ОФ и HIC заключается в том, что в ВЭЖХ с ОФ используется более полярная подвижная фаза и менее полярная стационарная фаза, тогда как в HIC используется гидрофобная стационарная фаза, которая позволяет гидрофобным молекулам прикрепляться к ней.
Приведенная ниже инфографика суммирует разницу между ВЭЖХ с обращенной фазой и HIC.
Резюме – ОФ ВЭЖХ по сравнению с HIC
Хроматография – это аналитический метод разделения компонентов в смеси. ВЭЖХ с обращенной фазой и HIC представляют собой два специализированных хроматографических метода. Ключевое различие между ВЭЖХ с ОФ и HIC заключается в том, что ВЭЖХ с ОФ использует более полярную подвижную фазу и менее полярную стационарную фазу, тогда как HIC использует гидрофобную стационарную фазу, которая позволяет гидрофобным молекулам прикрепляться к ней.
