Ключевое различие между ВЭЖХ с обращенной фазой и ВЭЖХ с нормальной фазой заключается в том, что ВЭЖХ с обращенной фазой использует неполярную неподвижную фазу и полярную подвижную фазу, тогда как ВЭЖХ с нормальной фазой использует полярную неподвижную фазу и менее полярную подвижную фазу.
ВЭЖХ с нормальной фазой является старейшим методом ВЭЖХ, который Цветт использовал при разделении растительных экстрактов; он использовал мел в стеклянной колонке. Это был классический метод хроматографии, из-за которого его назвали «нормальным» методом. Обращенно-фазовая ВЭЖХ, с другой стороны, является противоположностью обычной методике, разработанной учеными в последнее время.
Что такое ВЭЖХ с обращенной фазой?
ВЭЖХ с обращенной фазой - это хроматографический метод, в котором мы используем гидрофобную стационарную фазу. Среди всех методов ВЭЖХ мы используем этот метод примерно в 70% из-за его широкой применимости и воспроизводимости. Неподвижная фаза неполярна, а подвижная фаза полярна.
В большинстве случаев ученые используют водную смесь воды с смешиваемым полярным органическим растворителем, таким как ацетонитрил или метанол, в качестве подвижной фазы. Следовательно, аналиты взаимодействуют с неполярной неподвижной фазой.
Что такое нормально-фазовая ВЭЖХ?
Нормально-фазовая ВЭЖХ – это хроматографический метод, в котором мы используем гидрофильную стационарную фазу. Это традиционный метод ВЭЖХ, хотя мы не так часто его используем. Неподвижная фаза полярна, а подвижная фаза неполярна. Что еще более важно, подвижная фаза этого метода на 100% органическая. Это означает, что для этого не используется вода.
Рисунок 01: Профиль образца для хроматограмм ВЭЖХ с нормальной и обращенной фазой в зависимости от полярности компонентов в анализируемом веществе.
Обычно стационарная фаза содержит диоксид кремния, циано, диол, амино-связанные фазы и т. д. Подвижные фазы включают органические растворители, такие как гексан, этилацетат и т. д. Этот метод основан на удержании молекул растворителя или аналита на полярная стационарная фаза.
В чем разница между обращенно-фазовой и нормально-фазовой ВЭЖХ?
ВЭЖХ с обращенной фазой - это хроматографический метод, в котором мы используем гидрофобную стационарную фазу. Неподвижная фаза этого метода неполярна, а подвижная фаза полярна. Более того, ученые используют водную смесь воды со смешиваемым полярным органическим растворителем, таким как ацетонитрил или метанол, в качестве подвижной фазы в ВЭЖХ с обращенной фазой. Напротив, ВЭЖХ с нормальной фазой представляет собой хроматографический метод, в котором мы используем гидрофильную стационарную фазу. Неподвижная фаза этого метода полярна, а подвижная фаза неполярна. Кроме того, ученые используют органические растворители, такие как гексан, этилацетат и т. д., в качестве подвижной фазы нормально-фазовой ВЭЖХ. Приведенная ниже инфографика представляет разницу между обращенно-фазовой и нормально-фазовой ВЭЖХ в табличной форме.
Резюме – ВЭЖХ с обращенной фазой и нормальной фазой
Методы ВЭЖХ с обращенной фазой и с нормальной фазой представляют собой два жидкостных хроматографических метода. Ключевое различие между ВЭЖХ с обращенной фазой и ВЭЖХ с нормальной фазой заключается в том, что ВЭЖХ с обращенной фазой использует неполярную неподвижную фазу и полярную подвижную фазу, тогда как ВЭЖХ с нормальной фазой использует полярную неподвижную фазу и менее полярную подвижную фазу.
