Ключевое различие между фрагментом Кленова и ДНК-полимеразой 1 заключается в том, что фрагмент Кленова представляет собой большую часть ДНК-полимеразы 1, у которой отсутствует экзонуклеазная активность от 5 'до 3', в то время как ДНК-полимераза является ферментом E. coli, который имеет все три домены, включая экзонуклеазную активность от 5 'до 3'.
ДНК-полимераза является одним из ключевых ферментов, участвующих в репликации ДНК в живых организмах. Существуют различные формы фермента ДНК-полимеразы, обнаруженные у эукариот и прокариот, в зависимости от размера и формы. ДНК-полимераза 1, 2 и 3 обнаружены только у прокариотических организмов, и они играют разные роли в репликации ДНК. ДНК-полимераза 1 имеет три домена с 5'-3'-полимеразной активностью, 3'-5'-экзонуклеазной активностью и 5'-3'-экзонуклеазной активностью. Фрагмент Кленова является протеолитическим продуктом ДНК-полимеразы 1. Он обладает 5-3'-полимеразной и 3'-5'-экзонуклеазной активностью интактной ДНК-полимеразы 1, но не имеет 5'-3'-экзонуклеазной активности.
Что такое фрагмент Кленова?
Фрагмент Кленова представляет собой большую часть ДНК-полимеразы 1. В отличие от ДНК-полимеразы 1, 5'-3'-экзонуклеазная активность не наблюдается во фрагменте Кленова, поскольку в нем отсутствует прямой экзонуклеазный домен 5'-3'. Фрагменты Кленова образуются путем расщепления ДНК-полимеразы 1 протеазой, называемой субтилизином, которая представляет собой фермент, расщепляющий белок. В некоторых применениях экзонуклеазная активность фрагмента Кленова от 3' до 5' становится нежелательной. Его можно удалить, внеся мутацию в ген, кодирующий фрагмент Кленова. Полученный фермент, обладающий полимеразной активностью только от 5' к 3', известен как экзо-фрагмент Кленова. Морфологически фрагмент Кленова напоминает правую руку человека. Он имеет N-концевой 3'-5'-экзонуклеазный домен и С-концевой полимеразный домен, разделенные примерно 30 A.
Рисунок 01: Фрагмент Кленова и ДНК-полимераза 1
Фрагмент Кленова является важным инструментом в молекулярно-биологических методах. Фрагменты Кленова имеют множество применений. Они чрезвычайно важны при клонировании с тупыми концами для получения фрагментов с тупыми концами. Фрагменты Кленова могут удалять 3'-выступы или заполнять 5'-выступы, образуя тупые концы. Кроме того, фрагменты Кленова используются для синтеза двухцепочечной ДНК из одиночных цепей. Кроме того, они используются для приготовления радиоактивно меченых зондов с использованием ДНК-зависимой активности ДНК-полимеразы от 5’ до 3’..
Что такое ДНК-полимераза 1?
ДНК-полимераза 1 (Pol 1) представляет собой фермент, обнаруженный у прокариот, который необходим для репликации бактериальной ДНК. Это первый тип ДНК-полимеразы, открытый Артуром Корнбергом в 1956 году. Pol 1 является наиболее распространенной полимеразой в E. coli. Он кодируется геном polA и состоит из 928 аминокислот. Он состоит из трех доменов. Все три домена выполняют разные функции. Два домена обладают экзонуклеазной активностью от 5' до 3' и экзонуклеазной активностью от 3' до 5'. Из-за этой активности, которой обладает Pol 1, он популярен как фермент, восстанавливающий ДНК, а не как фермент, реплицирующий ДНК. Третий домен обладает способностью катализировать множественные полимеризации (от 5' до 3') до высвобождения матричной ДНК и соединения фрагментов Окадзаки вместе путем заполнения новой ДНК и удаления праймеров РНК.
Рисунок 02: ДНК-полимераза
Pol 1, выделенный из кишечной палочки, широко использовался в молекулярных приложениях. Однако, как только Taq-полимераза была открыта, она заменила E Coli Pol 1 в технологии ПЦР. Taq-полимераза представляет собой термостабильную ДНК-полимеразу, принадлежащую Pol 1.
Каковы сходства между фрагментом Кленова и ДНК-полимеразой 1?
- Фрагмент Кленова представляет собой большую часть ДНК-полимеразы 1.
- Они обладают ДНК-зависимой ДНК-полимеразной активностью от 5’ до 3’ и экзонуклеазной активностью от 3’ до 5’, которые опосредуют корректуру.
- Они используются для разных целей.
В чем разница между фрагментом Кленова и ДНК-полимеразой 1?
Ключевое различие между фрагментом Кленова и ДНК-полимеразой 1 заключается в том, что фрагмент Кленова лишен экзонуклеазной активности от 5' до 3', в то время как ДНК-полимераза 1 обладает экзонуклеазной активностью от 5' до 3'. Таким образом, фрагмент Кленова имеет два домена, а ДНК-полимераза 1 - все три домена.
Ниже на инфографике показано более подробное различие между фрагментом Кленова и ДНК-полимеразой 1.
Резюме – Фрагмент Кленова против ДНК-полимеразы 1
ДНК-полимераза 1 представляет собой фермент E. coli, который имеет три домена: 5'-3'-домен полимеризации, 3'-5'-экзонуклеазный домен и 5'-3'-экзонуклеазный домен. Фрагмент Кленова представляет собой большую часть ДНК-полимеразы. В нем отсутствует один домен ДНК-полимеразы 1, который представляет собой экзонуклеазный домен с 5' по 3'. Ключевое различие между фрагментом Кленова и ДНК-полимеразой 1 заключается в том, что фрагменты Кленова не имеют экзонуклеазного домена от 5 'до 3', в то время как ДНК-полимераза 1 имеет экзонуклеазный домен от 5 'до 3'.
