Ключевая разница – накопительный гель и разделительный гель
Термины «накладывающий гель» и «разделяющий гель» используются при объяснении метода SDS-PAGE. SDS-PAGE или электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия - это лабораторный метод, который используется для разделения белковых молекул на основе их молекулярной массы. Теория, лежащая в основе этого метода, заключается в том, что белки с разной молекулярной массой демонстрируют разную скорость миграции; молекулы с низкой молекулярной массой мигрируют быстрее, тогда как молекулы с высокой молекулярной массой мигрируют медленно. Средой для миграции является гель. Существует два типа гелей, называемых укладывающим гелем и разделяющим гелем. Ключевое различие между укладывающим гелем и разделяющим гелем заключается в том, что pH укладывающего геля составляет 6,8, тогда как pH разделяющего геля составляет 8,8.
Что такое Stacking Gel?
Стекирующий гель представляет собой низкоконцентрированный полиакриламидный гель, который помещают поверх более концентрированного разделяющего геля (разделяющего геля) в методе SDS-PAGE. Укладочный гель используется для улучшения разрешения электрофореза. Разрешение увеличивается из-за разницы между концентрациями концентрирующего и разделяющего геля, которые влияют на белки в образце. Поскольку концентрация полиакриламида в конструкционном геле низкая, размер пор выше. Это также помогает увеличить разделение.
Укладочный гель представляет собой рыхлый полиакриламидный гель с большими порами, содержащий около 7% полиакриламида. Эти поры не служат значительным барьером для больших белковых молекул. Следовательно, этот гель незначительно влияет на подвижность этих белков. Это позволяет разделить белки по подвижности и размеру, концентрируя их между двумя гелями.
Рисунок 01: SDS-PAGE Акриламидный гель
pH укладочного геля составляет 6,8. Его рН кислее, чем у рассасывающего геля на 2 единицы рН. Этот pH означает более низкую ионную силу, следовательно, более высокое электрическое сопротивление. Это провоцирует подвижность белков по сравнению с другими заряженными частицами, присутствующими в геле.
Что такое разделительный гель?
Разделительный гель или разделяющий гель SDS-PAGEtechnique представляет собой высококонцентрированный полиакриламидный гель, который помещают поверх низкоконцентрированного стэкинг-геля. Разделительный гель содержит большое количество полиакриламида (10%). pH этого геля поддерживается на уровне pH=8,8, что является более высоким уровнем pH, чем у укладочного геля.
Рисунок 02: Аппарат для гель-электрофореза
Когда белковые молекулы достигают разделяющего геля, миграция этих молекул замедляется, поскольку разделяющий гель представляет собой гель высокой концентрации с малым размером пор, который может выступать в качестве значительного барьера для движения белковых молекул.. Это замедление позволяет другим белкам медленно мигрировать, чтобы догнать их, в результате чего между двумя гелями образуется узкая концентрированная полоса.
Какова связь между составляющим гелем и разделяющим гелем?
И накопительный гель, и разделительный гель используются в одном и том же аппарате
В чем разница между составляющим гелем и разделяющим гелем?
Стекирующий гель и разделительный гель |
|
| Стекирующий гель представляет собой низкоконцентрированный полиакриламидный гель, который помещают поверх более концентрированного разделяющего геля (разделяющего геля) в методе SDS-PAGE. | Разделяющий гель или разделяющий гель метода SDS-PAGE представляет собой высококонцентрированный полиакриламидный гель, который помещают поверх низкоконцентрированного стопинг-геля. |
| Размещение | |
| Стекирующий гель наносится на рассасывающий (разделяющий) гель. | Разделяющий гель помещают на дно емкости для гель-электрофореза. |
| Концентрация | |
| Высокая концентрация укладочного геля. | Концентрация разделительного геля низкая. |
| Содержание полиакриламида | |
| Укладочный гель содержит около 7% полиакриламида. | Разделительный гель содержит около 10% полиакриламида. |
| pH | |
| pH укладочного геля составляет 6,8. | pH разделительного геля 8,8. |
| Размер пор | |
| Укладочный гель имеет поры большого размера. | В разделительном геле присутствуют мелкие поры. |
| Разрешение | |
| Стекерный гель обеспечивает лучшее разрешение. | Разделяющий гель дает плохое разрешение. |
Резюме – Укладывающий гель против разделяющего геля
Стекирующий гель и разделительный гель - это два типа полиакриламидных гелей, используемых для лучшего разделения белковых молекул в данном образце. Разница между укладывающим гелем и разделяющим гелем заключается в том, что pH укладывающего геля составляет 6,8, тогда как pH разделяющего геля составляет 8,8.
