Ключевая разница - РНКАЗА A против РНКАЗы H
Рибонуклеазы - это нуклеазы, которые специфически расщепляют РНК на более мелкие единицы. Их можно разделить на две категории; эндорибонуклеазы и экзорибонуклеазы. Эндорибонуклеаза представляет собой эндонуклеазу, которая может расщеплять как одноцепочечную, так и двухцепочечную РНК. Он расщепляет фосфодиэфирные связи в полинуклеотидной цепи РНК. Примерами являются РНКаза A, РНКаза III, РНКаза T1, РНКаза P и РНКаза H. Экзорибонуклеаза представляет собой экзонуклеазу, которая расщепляет РНК путем удаления концевых нуклеотидов либо с 5’-конца, либо с 3’-конца молекулы РНК. Примерами являются РНКаза R, РНКаза II, РНКаза D и РНКаза PH. Ключевое различие между РНКАЗой А и РНКАЗой Н заключается в том, что РНКаза А представляет собой рибонуклеазу поджелудочной железы, которая специфически расщепляет одноцепочечную РНК на более мелкие компоненты, в то время как РНКаза Н является неспецифическим ферментом, который расщепляет РНК в гибриде РНК-ДНК на более мелкие единицы посредством гидролитический механизм.
Что такое РНКАЗА А?
РНКаза А представляет собой рибонуклеазу поджелудочной железы, которая специфически расщепляет неспаренные остатки цитозина и урацила на 3’-конце одноцепочечной РНК. РНКаза Н работает при более высокой концентрации соли (концентрация NaCl 0,3 М или выше). Гидролитическая реакция состоит из двух стадий. Он образует 3'-фосфорилированный продукт через 2', 3'-циклический монофосфатный промежуточный продукт. Хотя он специфичен для одноцепочечной РНК при более высокой концентрации соли, он также может разрушать двухцепочечную РНК и РНК в гибриде РНК-ДНК при более низкой концентрации NaCl (ниже 0,3 М NaCl).
Брюс Меррифилд впервые синтезировал этот фермент. РНКаза А - очень популярный фермент в молекулярных исследованиях. РНКаза А бычьей поджелудочной железы является примером РНКазы А. И это один из самых стойких ферментов, которые используются в лаборатории. Этот фермент не нуждается в кофакторе для своей активности. Это очень термостабильный фермент. РНКаза А является первым ферментом и третьим белком, для которого была обнаружена правильная аминокислотная последовательность. Этот фермент очень мал, состоит из 124 аминокислот и имеет молекулярную массу 12600 da. И он имеет четыре остатка гистидина (His 12 и His 119, которые участвуют в каталитической реакции).
Рисунок 01: РНКаза A
РНКазу А можно выделить кипячением неочищенного образца. При кипячении все другие ферменты расщепляют оставшуюся РНКазу А. РНКаза А - удивительно стабильный фермент. Этот фермент ингибируется белком-ингибитором рибонуклеазы, комплексами тяжелых металлов и ванадата уридина.
Что такое РНКаза H?
РНКаза H представляет собой неспецифический фермент рибонуклеазу, который может расщеплять РНК в гибриде РНК-ДНК посредством гидролитической реакции. РНКаза Н расщепляет 3'-орбитальную связь РНК в гибриде РНК-ДНК. В конечном итоге он производит продукты с 3'ОН- и 5'-концевыми фосфатными группами. В репликации ДНК он играет ключевую роль, удаляя РНК-праймер после образования новых цепей ДНК. В лабораторных условиях он специфически разрушает РНК в гибридах РНК-ДНК, но не ДНК и негибридизированную РНК. И этот фермент обычно используется для разрушения матрицы РНК после образования первой комплементарной цепи ДНК во время синтеза кДНК.
Рисунок 02: РНКаза H
РНКаза H также используется в тестах защиты от нуклеаз. Его также можно использовать для удаления поли-А-хвоста из мРНК. РНКаза Н обладает способностью разрушать некодирующую РНК внутри и снаружи клетки. Ионы металлов необходимы в качестве кофакторов для этой белковой активности. Хелатор (ЭДТА) можно использовать для ингибирования фермента РНКазы Н.
Каковы сходства между РНКАЗой A и РНКАЗой H?
- Оба являются белковыми по своей природе.
- Оба являются эндорибонуклеазами
- Оба могут разрушать РНК.
- Оба проводят гидролитические реакции.
- Молекулярные лаборатории используют и то, и другое.
В чем разница между РНКАЗой A и РНКАЗой H?
РНКАЗА A против РНКАЗы H |
|
| РНКаза А представляет собой рибонуклеазу поджелудочной железы, которая специфически расщепляет 3'-конец неспаренных остатков цитозина и урацила одноцепочечной РНК при более высокой концентрации соли. | РНКаза H представляет собой неспецифический фермент рибонуклеазу, который может расщеплять РНК в гибриде РНК-ДНК посредством гидролитической реакции. |
| Природа расщепления РНК | |
| РНКаза А специфически расщепляет одноцепочечную РНК при более высокой концентрации соли. | РНКаза H расщепляет РНК в гибриде РНК-ДНК. |
| Потребность в сопутствующих факторах деятельности | |
| РНКаза А не нуждается в кофакторах для своей активности. | РНКазе Н необходимы ионы металлов в качестве кофакторов для ее активности. |
| Ингибиторы активности белков | |
| Белок-ингибитор рибонуклеазы, комплексы тяжелых металлов и уридина с ванадатом ингибируют активность РНКазы А. | Хелатор (ЭДТА) ингибирует активность РНКазы Н. |
| Удаление РНК-праймера при репликации ДНК | |
| РНКаза А не используется для удаления РНК-праймеров при репликации ДНК. | РНКаза H используется для удаления РНК-праймеров при репликации ДНК |
| Удаление матрицы ДНК при синтезе комплементарной ДНК (К-ДНК) | |
| РНКаза А не используется для удаления матрицы РНК во время синтеза комплементарной ДНК (К-ДНК). | РНКаза H используется для удаления матрицы РНК во время синтеза комплементарной ДНК (C-DNA). |
| Удаление Poly-A-Tail в мРНК, гибридизованной с Oligo (dt) | |
| РНКаза А не используется для удаления «хвоста поли-А» в мРНК, гибридизованной с олиго (dt). | РНКаза Н используется для удаления «хвоста поли-А» в мРНК, гибридизованной с олиго (dt) |
Резюме – РНКАЗА A против РНКАЗы H
Рибонуклеазы представляют собой нуклеазные ферменты, способные расщеплять РНК на более мелкие единицы. Они двух типов; эндорибонуклеазы и экзорибонуклеазы. Эндорибонуклеаза представляет собой эндонуклеазу, способную расщеплять одноцепочечную или двухцепочечную РНК. И он расщепляет фосфодиэфирную связь в полинуклеотидной цепи РНК. РНКаза А и РНКаза Н представляют собой две эндорибонуклеазы. РНКаза А представляет собой рибонуклеазу поджелудочной железы, которая специфически расщепляет неспаренные остатки цитозина и урацила на 3'-конце одноцепочечной РНК при более высокой концентрации соли. РНКаза H представляет собой неспецифический фермент рибонуклеазу, который может расщеплять РНК в гибриде РНК-ДНК посредством гидролитической реакции. В этом разница между РНКазой А и РНКазой Н.
Загрузить PDF-файл RNASE A и RNASE H
Вы можете загрузить PDF-версию этой статьи и использовать ее в автономном режиме в соответствии с примечанием к цитированию. Пожалуйста, загрузите PDF-версию здесь. Разница между РНКАЗой A и РНКАЗой H
