Ключевое различие между ультрацентрифугированием в градиенте сахарозы и ультрацентрифугированием в подушке сахарозы заключается в том, что при ультрацентрифугировании в градиенте сахарозы используется непрерывный градиент сахарозы, а в ультрацентрифугировании в подушке сахарозы используется прерывистый градиент сахарозы.
Градиент сахарозы и ультрацентрифугирование с подушкой сахарозы - это два похожих метода, используемых для разделения определенных типов макромолекул. В обоих методах используется градиент плотности сахарозы. Но при ультрацентрифугировании в градиенте сахарозы используется непрерывный градиент плотности, тогда как при ультрацентрифугировании в подушке из сахарозы используется прерывистый градиент плотности.
Что такое ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы?
Ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы - это метод, который можно использовать для фракционирования макромолекул, таких как ДНК, РНК и белки. В этой технике есть несколько шагов. Это приготовление градиента сахарозы, центрифугирование, разделение и элюирование. Подготовка градиента является ключевым этапом в этой технике. В этом методе образец, содержащий макромолекулы разного размера, наслаивают на поверхность колонки с градиентом сахарозы. При центрифугировании макромолекулы разного размера осаждаются через колонку с градиентом сахарозы с разной скоростью. Седиментация зависит от нескольких факторов, в том числе от силы центрифугирования, размеров формы и плотности макромолекул, плотности и градиента вязкости. В конце центрифугирования макромолекулы пространственно разделены по плотности. Более крупные макромолекулы (макромолекулы высокой плотности) оседают на дно. Более легкие (макромолекулы низкой плотности) остаются в верхней части градиента. Поэтому молекулы расходятся в виде разных полос. Затем следует разделить полосы и провести очистку конкретной макромолекулы от сахарозы.
Рисунок 01. Ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы
С точки зрения применения этот метод широко используется для фракционирования молекул ДНК. Ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы обычно используется для характеристики размера и состава белковых комплексов. Кроме того, этот метод используется для частичной очистки мРНК.
Что такое ультрацентрифугирование в сахарозной подушке?
Ультрацентрифугирование в подушке из сахарозы - еще один метод, позволяющий фракционировать макромолекулы. В отличие от ультрацентрифугирования с градиентом плотности сахарозы, ультрацентрифугирование с подушкой сахарозы использует прерывистый градиент плотности. Концентрация сахарозы увеличивается сверху вниз дискретными шагами. В этом методе разделение достигается путем помещения осветленного экстракта поверх небольшого объема раствора сахарозы в центрифужной пробирке, так называемой сахарозной подушке. Это обеспечивает лучшее разделение при высокоскоростном центрифугировании. Когда молекулы разделяются в виде полосы между сахарозной подушкой, белая полоса может быть собрана и очищена. Кроме того, примеси могут быть дополнительно удалены с использованием метода сахарозной подушки. Метод сахарозной подушки позволяет заполнить пробирку образцом на 60-70%. Следовательно, метод сахарозной подушки позволяет обрабатывать больший объем образца.
Каковы сходства между градиентом сахарозы и ультрацентрифугированием в подушке сахарозы?
- Сахарозный градиент и ультрацентрифугирование с сахарозной подушкой - это два метода, которые используются для разделения смеси макромолекул.
- В обоих методах используется градиент сахарозы.
- Центрифугирование является этапом в обоих методах.
- Молекулы оседают в виде полосы или зоны в каждом методе.
В чем разница между градиентом сахарозы и ультрацентрифугированием на сахарозной подушке?
Ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы - это метод, в котором используется непрерывный градиент сахарозы в центрифужной пробирке, в то время как ультрацентрифугирование в подушке сахарозы - это метод, в котором используется прерывистый градиент сахарозы. Таким образом, это ключевое различие между градиентом сахарозы и ультрацентрифугированием в подушке из сахарозы.
Кроме того, ультрацентрифугирование в сахарозной подушке позволяет обрабатывать больший объем образца, в то время как ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы позволяет обрабатывать сравнительно небольшой объем образца.
Ниже в инфографике приведены дополнительные различия между градиентом сахарозы и ультрацентрифугированием с подушкой сахарозы.
Резюме – Градиент сахарозы по сравнению с ультрацентрифугированием в подушке сахарозы
Ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы позволяет разделить макромолекулы с использованием непрерывного градиента сахарозы. Напротив, ультрацентрифугирование с подушкой из сахарозы использует прерывистый градиент сахарозы для разделения частиц определенного типа в смеси. Итак, в этом ключевое различие между градиентом сахарозы и ультрацентрифугированием с подушкой сахарозы. Метод сахарозной подушки позволяет собирать морфологически неповрежденные частицы, поскольку он не вызывает механического напряжения, в отличие от ультрацентрифугирования в градиенте сахарозы, при котором молекулы дробятся на дно пробирки. Кроме того, ультрацентрифугирование в сахарозной подушке позволяет обрабатывать больший объем образца, чем ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы.
