Основное различие между электрофорезом в агарозном и полиакриламидном геле заключается в том, что при электрофорезе в агарозном геле используются горизонтально заливаемые агарозные гели для разделения сравнительно больших фрагментов ДНК, тогда как при электрофорезе в полиакриламидном геле используются вертикально заливаемые полиакриламидные гели для разделения более коротких фрагментов нуклеиновой кислоты.
Электрофорез - это метод, в котором электрическое поле прикладывается к гелевой матрице для разделения биомолекул, таких как ДНК, РНК и белки. Это разделение биомолекул, таких как ДНК, РНК и белки, с помощью электрофореза основано на заряде и размере. Образцы загружают в лунки геля. Позже к гелю прикладывают электрическое поле. Поле заставляет отрицательно заряженные молекулы двигаться к положительному электроду. Матрица геля действует как молекулярное сито, через которое самые маленькие молекулы проходят или перемещаются быстро, в то время как более крупные молекулы движутся медленно. Это позволяет разделять молекулы по заряду и размеру. Следовательно, электрофорез в агарозном и полиакриламидном геле представляет собой два типа методов гель-электрофореза, которые в основном помогают разделить молекулы в зависимости от их размера и заряда.
Что такое электрофорез в агарозном геле?
Электрофорез в агарозном геле - это метод, в котором используются агарозные гели для разделения биомолекул, таких как ДНК и РНК. Это метод, используемый для разделения нуклеиновых кислот в основном по размеру. Основное соединение, называемое агарозой, используемое в этом методе, представляет собой полисахарид. Получается из морских водорослей. Агарозу можно растворить в кипящем буфере, а затем вылить в лоток, который стоит горизонтально. В лотке он затвердевает, когда остывает, образуя плиту. Агарозные гели заливают с помощью гребенки, чтобы сделать лунки, в которые загружают нуклеиновые кислоты, такие как ДНК или РНК, после затвердевания геля.
Рисунок 01: Электрофорез в агарозном геле
Гель позже погружают в соответствующий буфер и через гель пропускают ток. ДНК имеет равномерный отрицательный заряд, который не зависит от последовательности состава молекулы. Следовательно, молекулы ДНК будут мигрировать от катода (-) к аноду (+). Скорость миграции напрямую зависит от размера молекулы. Самым крупным макромолекулам труднее всего ориентироваться в геле. С другой стороны, более мелкие макромолекулы быстро и довольно легко проскальзывают через гель.
Что такое электрофорез в полиакриламидном геле?
Электрофорез в полиакриламидном геле (PAGE) – это метод, в котором для разделения биомолекул используются полиакриламидные гели. Это метод, который широко используется для разделения биологических макромолекул, обычно белков и нуклеиновых кислот, в соответствии с их электрофоретической подвижностью. Гидратация акрилонитрила приводит к образованию молекул акриламида нитрилгидратазой. Акриламид растворим в воде, и при добавлении инициаторов свободных радикалов акриламид полимеризуется, в результате чего образуется полиакриламидный гель. Обычно повышенные концентрации акриламида приводят к уменьшению размера пор в геле. Полиакриламидные гели заливают вертикально, в отличие от агарозных гелей.
Рисунок 02. Электрофорез в полиакриламидном геле
При электрофорезе в полиакриламидном геле молекулы могут работать в своем естественном состоянии, сохраняя структуру молекул более высокого порядка. Этот метод называется Native PAGE. В качестве альтернативы можно также добавить химический денатурант, чтобы удалить структуру более высокого порядка и превратить молекулу в неструктурированную молекулу, подвижность которой зависит только от ее длины. Этот тип называется SDS-PAGE.
Каковы сходства между электрофорезом в агарозном и полиакриламидном геле?
- Электрофорез в агарозном и полиакриламидном геле представляет собой два типа методов гель-электрофореза.
- По сути, это молекулярно-биологические методы.
- Оба метода используются для обнаружения биологических макромолекул, таких как ДНК и белки.
- Эти методы выполняются квалифицированными специалистами или исследователями.
- В обоих методах разделение макромолекул основано на заряде и размере.
- Оба метода позволяют разделять нуклеиновые кислоты, такие как ДНК и РНК.
В чем разница между электрофорезом в агарозном и полиакриламидном геле?
Электрофорез в агарозном геле - это метод, в котором используются горизонтально залитые агарозные гели для разделения биомолекул, а электрофорез в полиакриламидном геле - это метод, в котором для выделения биомолекул используются вертикально залитые полиакриламидные гели. В этом ключевое различие между электрофорезом в агарозном и полиакриламидном геле. Кроме того, электрофорез в агарозном геле используется для разделения ДНК и РНК, тогда как электрофорез в полиакриламидном геле используется для разделения нуклеиновых кислот, таких как ДНК, РНК или белки.
В следующей таблице приведены различия между электрофорезом в агарозном и полиакриламидном геле.
Резюме – Электрофорез в агарозном или полиакриламидном геле
Электрофорез в агарозном и полиакриламидном геле - это два типа методов гель-электрофореза, используемых в лабораториях молекулярной биологии. Электрофорез в агарозном геле использует агарозный гель для разделения биомолекул. Агароза обычно не токсична для человека, тогда как полиакриламид токсичен для человека. Кроме того, электрофорез в агарозном геле показывает низкое разрешение, в то время как электрофорез в полиакриламидном геле показывает более высокое разрешение. Электрофорез в полиакриламидном геле использует полиакриламидный гель для выделения биомолекул. Это суммирует разницу между электрофорезом в агарозном и полиакриламидном геле
