Основное различие между конкурентным и неконкурентным ИФА заключается в том, что в конкурентном ИФА используется ингибирующий антиген, в то время как в неконкурентном ИФА не используется ингибирующий антиген для анализа.
Иммуноферментный анализ (ИФА) - это иммунологический анализ, который обнаруживает различные мишени, такие как антитела, антигены, белки и гликопротеины. Это быстрый и простой способ выполнения. Поэтому его чаще используют в исследовательских и диагностических целях. ELISA включает использование ферментов и специфическое связывание антитела и антигена. В зависимости от того, как происходят реакции, существует четыре типа ELISA: прямой ELISA, непрямой ELISA, сэндвич-ELISA и ELISA с ингибированием. Прямой, непрямой и сэндвич-ELISA являются типами неконкурентного ELISA, в то время как ELISA с ингибированием является типом комплементарного ELISA. Основная цель этой статьи - обсудить разницу между конкурентным и неконкурентным ИФА.
Что такое конкурентный ИФА?
Конкурентный ИФА измеряет концентрацию антигена в образце путем обнаружения интерференции сигналов. Здесь в анализе используется антиген-ингибитор. Следовательно, это тип ингибирования ELISA. Во время этой процедуры антигены, присутствующие в образце, конкурируют с выбранным эталонным антигеном за связывание с определенным количеством меченого антитела. Кроме того, эта процедура начинается с инкубации образца с избыточным количеством меченого антитела. Кроме того, эталонный антиген должен быть предварительно нанесен на многолуночный планшет для анализа. Затем смесь образцов следует добавить в планшет для анализа, содержащий эталонный антиген. Свободные антитела будут связываться с эталонным антигеном в зависимости от количества антигена в образце. Следовательно, если в образце присутствует больше антигена, будет обнаружено меньше эталонного антигена. Таким образом, он создает более слабый сигнал.
Рисунок 01: ИФА
Напротив, когда образец содержит меньшее количество антигена, все больше и больше эталонного антигена будет занимать антитела и давать сильный сигнал. Поскольку конкурентный ИФА дает более сильный сигнал, когда образец содержит небольшое количество антигенов, конкурентный ИФА является очень чувствительным анализом даже для образцов с небольшим количеством антигенов.
В некоторых конкурирующих наборах ELISA вместо меченого антитела используется меченый антиген. Здесь меченый антиген и антиген образца будут конкурировать за связывание с первичным антителом. Точно так же, когда количество антигена в образце низкое, количество меченого антигена, связывающегося с антителами, будет выше и создаст более сильный сигнал.
Что такое неконкурентный ИФА?
Среди четырех типов ИФА три типа являются неконкурентными ИФА. Это прямой ИФА, непрямой ИФА и сэндвич-ИФА. Все три формата работают по общему принципу ELISA с небольшими различиями в методологиях.
Прямой ИФА использует первичное антитело, меченное ферментом. Следовательно, он не требует вторичного антитела. Таким образом, прямой ИФА быстрее, чем другие типы ИФА. Первичное антитело будет напрямую связываться с иммобилизованным антигеном-мишенью, присутствующим в планшете. Следовательно, будет происходить фермент-субстратная реакция, дающая видимый сигнал.
Рисунок 02: Сэндвич-ИФА
В отличие от прямого ИФА, непрямой ИФА использует немеченое первичное антитело и вторичное антитело, меченное ферментом. Как только первичное антитело связывается с иммобилизованным антигеном, вторичное антитело связывается с первичным антителом. Фермент вторичного антитела будет реагировать с антигеном и производить видимый сигнал. Сэндвич-ИФА отличается как от прямого, так и от непрямого ИФА. Здесь антитело иммобилизовано на стенке планшета для анализа.
Каковы сходства между конкурентным и неконкурентным ИФА?
- Конкурентный и неконкурентный ИФА – это два типа методов иммуносорбентного анализа.
- Это очень гибкие и чувствительные техники.
- Кроме того, как конкурентный, так и неконкурентный ИФА являются иммуноферментными анализами.
- Кроме того, оба метода генерируют сигнал благодаря реакции фермент-субстрат.
В чем разница между конкурентным и неконкурентным ИФА?
Конкурентный ИФА - это тип ИФА, который основан на завершении между анализируемым антигеном и меченым антигеном для ограниченного количества специфического антитела. С другой стороны, такой конкуренции между интересующим антигеном и эталонным антигеном в неконкурентном ИФА не существует. Таким образом, в этом ключевое различие между конкурентным и неконкурентным ИФА. Точно так же конкурентный ELISA представляет собой ELISA с ингибированием, тогда как неконкурентный ELISA не является ELISA с ингибированием. Таким образом, это также разница между конкурентным и неконкурентным ИФА.
Кроме того, конкурентный ИФА больше подходит для измерения небольшого количества интересующего антигена. Это чувствительный метод. С другой стороны, неконкурентный ИФА не зависит от количества антигенов, присутствующих в образце. Следовательно, в этом также заключается разница между конкурентным и неконкурентным ИФА.
Приведенная ниже инфографика объясняет разницу между конкурентным и неконкурентным ИФА в сравнении.
Резюме – конкурентный и неконкурентный ИФА
Конкурентный и неконкурентный ИФА – это два основных типа ИФА или твердофазного иммуноферментного анализа. Обобщая разницу между конкурентным и неконкурентным ИФА, конкурентный ИФА основан на конкуренции между интересующим антигеном и эталонным антигеном за ограниченное количество антител. Поэтому конкурентный ELISA также называют ELISA с ингибированием. С другой стороны, неконкурентный ИФА не основан на конкуренции между антигенами-мишенями и эталонными антигенами. Он использует избыток меченых специфических антител по отношению к интересующему аналиту. Таким образом, в этом ключевое различие между конкурентным и неконкурентным ИФА. Прямой ИФА, непрямой ИФА и сэндвич-ИФА - три основных типа неконкурентного ИФА.
