Основное различие между колориметрическим и флуорометрическим анализом заключается в том, что колориметрический анализ определяет концентрацию окрашенных соединений в растворе, а флуорометрический анализ определяет кинетический механизм раствора.
Биохимический анализ – это метод, который обнаруживает или количественно определяет активность биологической молекулы или вещества аналитически. Это процесс in vitro. Колориметрический анализ и флуорометрический анализ - это два типа распространенных биохимических анализов, проводимых в лабораториях. Несколько методов, таких как ELISA и вестерн-блоттинг, также являются сложными биохимическими анализами для количественной оценки метаболической активности и измерения функционального поведения биомолекул, таких как белки, ферменты и другие малые молекулы. Эти типы анализов используются для идентификации взаимодействий белок-ДНК, белок-РНК и белок-белок.
Что такое колориметрический анализ?
Колориметрический анализ – это метод определения концентрации окрашенных соединений в растворе. Другими словами, колориметрический анализ представляет собой реакцию, которая приводит к изменению цвета вследствие ферментативной или химической реакции между реагентами и аналитами. Колориметрические анализы практикуются в биохимии для проверки ферментов, специфических соединений, гормонов, антител и других аналитов. Они используют колориметры или спектрофотометры. Колориметры - это инструменты, которые характеризуют окрашенные образцы, чтобы обеспечить объективную оценку характеристик цвета. Спектрофотометр - это устройство, которое измеряет интенсивность света в зависимости от цвета или длины волны света.
Рисунок 01: Колориметрический анализ
Как работает колориметрический анализ?
В колориметрическом анализе готовится планшет с определенным антителом, связанным с лунками. Затем добавляется образец. Это может позволить образцу связать антитело. Затем в лунки добавляют детектирующее антитело и субстрат для реакции с детектирующим зондом. Стоп-раствор добавляют в конце перед измерением. Пустая лунка, называемая бланком, остается без образца. В колориметрическом анализе чем темнее цвет, тем выше концентрация аналита. Обычно для измерения требуется только одна длина волны. Но если есть эталонное измерение, используются две или более длин волн.
Что такое флуорометрический анализ?
Флуорометрический анализ – это метод, определяющий кинетический механизм ферментативных реакций. Флуорометрический анализ происходит с образованием флуоресцентного продукта из нефлуоресцентного субстрата или наоборот. В этом анализе также используется резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET), где ферментативная реакция изменяет положение двух флуорофоров в субстрате, таким образом, изменяя интенсивность флуоресценции.
Рисунок 02: Флуорометрический анализ
Флуорометрические анализы, как правило, гораздо более чувствительны, чем другие анализы. Диагностические оценки ферментов в образцах тканей, клеток или жидкостей пациентов увеличиваются из-за его более высокой чувствительности.
Как работает флуорометрический анализ?
В флюорометрическом анализе субстрат добавляется к образцу в планшете, и флуоресцентный отклик измеряется с помощью планшетного ридера. Здесь каждая ячейка измеряется отдельно. Непрозрачные пластины используются во флуорометрических анализах. Это уменьшает рассеивание света. Две длины волны необходимы для этого типа анализа. Одна длина волны предназначена для обнаружения возбуждения, а другая длина волны - для излучения.
Каковы сходства между колориметрическим и флуорометрическим анализом?
- Колориметрический анализ и флуорометрический анализ - это два типа биохимических анализов.
- Оба теста проводятся для медицинской диагностики.
- Эти анализы включают ферментативную реакцию.
- Оба анализа включают субстрат и аналиты.
В чем разница между колориметрическим и флуорометрическим анализом?
Колориметрический анализ – это метод, определяющий концентрацию окрашенных соединений в растворе, а флуориметрический анализ – это метод, определяющий кинетический механизм ферментативных реакций. Итак, в этом ключевое различие между колориметрическим и флуорометрическим анализом. Более того, флуорометрические анализы более чувствительны, чем колориметрические; таким образом, флуорометрические анализы позволяют обнаруживать большее количество аналитов. Таким образом, это еще одно важное различие между колориметрическим и флуорометрическим анализом. Кроме того, для флуорометрического анализа требуются две длины волны, а для колориметрического анализа используется одна длина волны.
Приведенная ниже инфографика содержит больше различий между колориметрическим и флуориметрическим анализом.
Резюме – колориметрический и флуорометрический анализы
Биохимический анализ – это аналитический процесс, используемый для определения и количественного определения клеточных метаболических реакций. Колориметрический анализ и флуорометрический анализ представляют собой два типа биохимических анализов. Колориметрический анализ - это реакция, которая приводит к изменению цвета из-за ферментативной или химической реакции между реагентами и аналитами, тогда как флуориметрический анализ - это метод, который используется для определения кинетического механизма ферментативных реакций. Оба анализа зависят от ферментативной реакции, в которой участвуют субстрат и аналит. Флуорометрические анализы более чувствительны, чем колориметрические. Самое главное, что для флуориметрических анализов требуются две длины волны, в то время как для колориметрических анализов можно использовать только одну длину волны. Таким образом, это суммирует разницу между колориметрическим и флуорометрическим анализом.
