ПЦР против ПЦР в реальном времени
ПЦР или полимеразная цепная реакция - революционное открытие в современной молекулярной биологии, впервые разработанное химиком Кэри Маллисом в 1983 году. Она позволяет амплифицировать одну последовательность в сложной ДНК для анализа. Основная идея ПЦР заключается в том, что два праймера, комплементарные противоположным цепям последовательности ДНК, ориентированы друг к другу; праймеры производят комплементарные нити, каждая из которых содержит другой праймер. Следовательно, в результате получается большое количество последовательности, соответствующей ДНК, лежащей между двумя праймерами. Фермент ДНК-полимераза используется для удлинения праймеров в ПЦР. ДНК-полимераза является термостабильным ферментом и способна выживать при высоких температурах (от 94 до 95 °C), используемых для денатурации матричной ДНК.
ПЦР включает в себя три этапа, а именно, повторные циклы денатурации, отжиг праймеров и синтез ДНК. Для проведения этой реакции используется термоциклер, который можно запрограммировать на быстрое и точное изменение температуры. ПЦР применяется в криминальных расследованиях, дактилоскопии ДНК, обнаружении патогенов и анализе ДНК ранних видов человека.
Что такое обычная ПЦР?
Существуют три основных этапа обычной ПЦР, а именно; Стадия амплификации ДНК, разделение ПЦР и обнаружение продуктов. Разделение сегментов ДНК обычно проводят электрофорезом в агарозном геле. Затем продукты окрашивают бромистым этидиумом. Наконец, обнаружение достигается визуализацией полос на гелях под УФ-светом. Поэтому окончательные результаты обычной ПЦР не выражаются числами. Обычно обычная ПЦР способна определить только один параметр.
Что такое ПЦР в реальном времени?
ПЦР в реальном времени может обнаруживать амплификацию продуктов по мере их синтеза. С развитием технологий ПЦР стала очень популярным методом, особенно для обнаружения и идентификации бактерий в пищевых продуктах. ПЦР в реальном времени использует систему флуоресцентного красителя и термоциклер, оснащенный функцией флуоресцентной детекции.
В чем разница между традиционной ПЦР и ПЦР в реальном времени?
• Обычная ПЦР требует больше времени, поскольку для анализа амплифицированных продуктов ПЦР используется гель-электрофорез. Напротив, ПЦР в реальном времени требует меньше времени, поскольку позволяет обнаруживать амплификации на ранних фазах реакции.
• ПЦР в реальном времени собирает данные в фазе экспоненциального роста ПЦР, в то время как традиционная ПЦР собирает данные в конечной точке реакции.
• Конечные результаты традиционной ПЦР могут быть не очень точными, но результаты ПЦР в реальном времени очень точны.
• ПЦР в реальном времени более чувствительна, чем обычная ПЦР.
• Обычная ПЦР имеет очень низкое разрешение, в то время как ПЦР в реальном времени может обнаружить очень небольшие изменения из-за высокого разрешения.
• Обнаружение конечной точки обычной ПЦР имеет короткий динамический диапазон, в то время как обнаружение ПЦР в реальном времени имеет широкий динамический диапазон.
• В отличие от обычной ПЦР, в ПЦР в реальном времени используются автоматизированные методы обнаружения.
• Традиционная ПЦР является более сложной и трудоемкой, чем ПЦР в реальном времени.
• В отличие от ПЦР в реальном времени, обычная ПЦР не может отличить мертвые бактерии от живых.
• ПЦР в реальном времени использует систему флуоресцентного красителя для обнаружения продуктов, в то время как обычная ПЦР использует бромид этидия и УФ-свет для визуализации полос в среде агарозного геля.
