Ключевая разница - Phusion против полимеразы Taq
ДНК-полимеразы являются широко используемыми ферментами в методах молекулярной биологии, а также естественным образом присутствуют во всех организмах, которые подвергаются репликации ДНК. Они являются ключевыми полимеризующими ферментами, которые участвуют во время репликации. ДНК-полимераза способна присоединять нуклеотиды к свободному 3'-концу цепи ДНК, тем самым вызывая удлинение новой цепи. В настоящее время в связи с развитием молекулярной биологии в диагностике заболеваний и промышленном применении важно производить полимеразы, обладающие различными полезными свойствами. Это повышает точность метода и делает его более быстрым. Phusion и Taq полимераза представляют собой два коммерчески производимых термостабильных фермента полимеразы, которые используются в специальных молекулярных приложениях. Phusion представляет собой ДНК-полимеразу, выделенную из Pyrococcus furiosus, и в основном используется в экспериментах по клонированию для повышения точности. ДНК-полимераза Taq представляет собой стандартную ДНК-полимеразу, используемую в полимеразной цепной реакции (ПЦР), и ее выделяют из термостабильной бактерии; Водяной термус. Ключевое различие между двумя ферментами заключается в исходном микроорганизме. Phusion выделяют из экстремофилов Pyrococcus furiosus, тогда как Taq-полимеразу выделяют из термофилов Thermus aquaticus.
Что такое Phusion?
ДНК-полимераза Phusion - это новая полимераза, которая производится путем выделения фермента из Pyrococcus furiosus, который является экстремофильной археей. Эти микробы обитают в чрезвычайно высокотемпературных условиях, что делает полимеразу очень термостабильной полимеразой. Полимераза Phusion используется для получения максимальной точности по сравнению с обычной термостабильной полимеразой; Taq-полимераза. Phusion полимераза способна амплифицировать длинные матрицы до 7,5 т.п.н. геномной ДНК. Оптимальная полимеризационная способность полимеразы Phusion составляет 72°С0°С. Phusion также используется в продуктах клонирования для секвенирования, анализа экспрессии и анализа мутаций.
ДНК-полимераза Phusion обладает 3’-5’-экзонуклеазной активностью. Это позволяет корректировать вновь синтезированную цепь после синтеза. Следовательно, несоответствия нуклеотидов легко исправить. Таким образом, он имеет меньший процент ошибок. Общие преимущества полимеразы Phusion:
- Экстремальная точность
- Высокая скорость и сокращение времени продления
- Надежные реакции и минимальная оптимизация
- Высокая доходность
Рисунок 01: Phusion
Основным недостатком полимеразы Phusion является то, что она ингибируется в присутствии дезоксиуридинтрифосфата (dUTP). Когда dUTP накапливается в реакционной смеси, это может ингибировать действие полимеразы Phusion. Этого можно избежать путем обработки реакционной смеси dUTPase перед добавлением фермента. В настоящее время для решения этой проблемы вместо полимеразы Phusion используется устойчивый к dUTP вариант полимеразы Phusion, известный как Pfu Turbo.
Что такое Taq-полимераза?
Изобретение ДНК-полимеразы Taq произвело революцию в области молекулярной биологии. Это решило серьезную проблему амплификации ДНК. ДНК-полимераза Taq представляет собой термостабильный полимеразный фермент, экстрагированный и выделенный из термофильной бактерии Thermus aquaticus. Открытие этих ферментов привело к развитию ПЦР. Этот фермент позволил использовать полимеразную цепную реакцию для амплификации ДНК вместо традиционных трудоемких методов клонирования. В настоящее время ПЦР используется в молекулярной диагностике, сельском хозяйстве и промышленности, и в этот метод добавлено множество новых вариаций.
Рисунок 02: Taq-полимераза
ДНК-полимераза
Taq работает в оптимальном диапазоне температур от 720C до 800C. ДНК-полимеразе Taq требуется кофактор; магний для его функции. Taq-полимераза не обладает способностью корректировать 3 '– 5', поэтому частота ошибок Taq ДНК-полимеразы высока по сравнению с более новыми типами ДНК-полимераз, такими как полимераза Phusion и т. Д. Но популярность ДНК-полимеразы Taq остается одинаково во всем мире науки из-за удобства и гибкости фермента.
Каковы сходства между полимеразой Phusion и Taq?
- И ферменты полимеразы Phusion, и Taq являются полимеризующими ферментами, которые способны добавлять нуклеотиды к 3'-свободному концу цепи ДНК.
- Для полимеразы Phusion и Taq требуется последовательность праймера.
- Полимеразы Phusion и Taq термостабильны.
- Полимеразы Phusion и Taq используются в механизмах ПЦР для амплификации ДНК.
- При добавлении полимеразы в реакционную смесь полимеразы Phusion и Taq добавляются последними, чтобы обеспечить эффективность фермента.
- Полимеразы Phusion и Taq коммерчески синтезируются для экспериментальных целей молекулярной биологии.
- И Phusion, и Taq-полимераза нуждаются в кофакторе для завершения своей функции.
В чем разница между Phusion и Taq-полимеразой?
Phusion против полимеразы Taq |
|
| Phusion представляет собой ДНК-полимеразу, выделенную из Pyrococcus furiosus, и в основном используется в экспериментах по клонированию для повышения точности. | ДНК-полимераза Taq - это стандартная ДНК-полимераза, используемая в полимеразной цепной реакции (ПЦР). Она выделена из термостабильной бактерии Thermus aquaticus. |
| Организм-источник | |
| Phusion получают из экстремофильных архей – Pyrococcus furiosus. | Эти литературные произведения охватывают период от периода колонизации до периода деколонизации. |
| Умение корректора | |
| 3’ - в Phusion присутствует возможность чтения 5’ корректуры. | 3’ – 5’ способность корректора отсутствует у Taq-полимеразы. |
| Верность | |
| Высокая точность воспроизведения с Phusion. | Taq-полимераза показывает низкую точность. |
| Усиление | |
| Phusion способен амплифицировать длинные фрагменты ДНК. | Taq-полимераза способна амплифицировать гораздо более короткие фрагменты ДНК. |
| отравление dUTP | |
| Фузионное действие подавляется накоплением нечетного. | Taq-полимераза не ингибируется dUPT. |
Резюме – Phusion против полимеразы Taq
Phusion и ДНК-полимераза Taq представляют собой две термостабильные полимеразы, которые используются в методах ПЦР. Phusion представляет собой полимеразу, выделенную из экстремофилов Pyrococcus furiosus, тогда как Taq выделяют из термостабильных бактерий Thermus aquaticus. Открытие ДНК-полимеразы Taq привело к изобретению ПЦР. Phusion имеет много преимуществ по сравнению с Taq, что сделало Phusion лучшим вариантом для получения ДНК с высокой точностью. Однако полимераза Taq по-прежнему используется в качестве стандартного полимеразного фермента в ПЦР. В этом разница между полимеразой Phusion и Taq.
