Ключевое различие между радиоактивными и нерадиоактивными зондами заключается в том, что радиоактивные зонды представляют собой последовательности одноцепочечной ДНК или РНК, помеченные радиоактивными изотопами, а нерадиоактивные зонды представляют собой последовательности одноцепочечной ДНК или РНК, помеченные химической меткой или флуоресцентная метка.
Гибридизация нуклеиновых кислот является важным методом в молекулярной биологии, особенно в микробной диагностике. Это помогает идентифицировать или обнаружить определенную последовательность нуклеиновой кислоты. В этом методе нуклеиновые кислоты фиксируются на твердой поверхности и гибридизуются с зондом. Зонд представляет собой фрагмент ДНК или РНК, комплементарный интересующей последовательности. Если целевая последовательность присутствует в образце, зонд гибридизуется с ней и делает ее обнаруживаемой. Существует два типа зондов: радиоактивные и нерадиоактивные зонды. Поэтому мы можем пометить зонды радиоактивной или флуоресцентной меткой.
Что такое радиоактивные зонды?
Радиоактивные зонды представляют собой фрагменты одноцепочечной ДНК или РНК с радиоактивной меткой. Радиоизотопы используются для изготовления радиоактивных зондов. Радиоизотопы 32P, 33P и 35S обычно используются для маркировки зондов. Кроме того, радиоизотопы 3H и 1251 также в меньшей степени используются при маркировке зондов. Но они используются для конкретных приложений. Среди различных радиоизотопов изотоп 32P чаще всего используется для маркировки радиоактивных зондов.
Радиоактивные зонды обеспечивают более высокую степень надежности и специфичности. Таким образом, они обеспечивают максимальную чувствительность и позволяют проводить точную количественную оценку последовательностей-мишеней. Однако есть несколько недостатков, связанных с радиоактивными зондами. У них короткий период полураспада. Более того, они опасны, а производство, использование и утилизация при обращении с ними проблематичны. Кроме того, подготовка радиоактивных зондов является дорогостоящим процессом. Поэтому из-за проблем безопасности и стоимости радиоактивные зонды в настоящее время не используются в качестве нерадиоактивных зондов.
Что такое нерадиоактивные зонды?
Нерадиоактивные зонды - это второй тип зондов с химической меткой. Дигоксигенин представляет собой нерадиоактивный зонд, представляющий собой маркер на основе антител. Зонды дигоксигенина специфичны и чувствительны. Биотин - еще одна метка, используемая при приготовлении нерадиоактивных зондов. Системы обнаружения биотин/стрептавидин и дигоксигенин/антитело являются наиболее часто используемыми нерадиоактивными зондами при гибридизации. Кроме того, система пероксидазы хрена является еще одной нерадиоактивной зондовой системой. Как только эти нерадиоактивные зонды гибридизуются с последовательностями-мишенями, их можно обнаружить с помощью авторадиографии или других методов визуализации.
Рисунок 01: Гибридизация с нерадиоактивными зондами
Нерадиоактивные зонды чаще используются при гибридизации нуклеиновых кислот, чем радиоактивные зонды. Это связано с тем, что нерадиоактивные зонды не связаны с опасными материалами. Кроме того, нерадиоактивные методы обнаружения требуют более короткого времени воздействия для обнаружения сигнала гибридизации. Однако шаги, связанные с гибридизацией ДНК с нерадиоактивными зондами, обычно утомительны и требуют много времени. Более того, имеющиеся в продаже решения стоят дорого.
Каковы сходства между радиоактивными и нерадиоактивными зондами?
- Радиоактивные и нерадиоактивные зонды представляют собой два типа зондов, используемых при гибридизации нуклеиновых кислот.
- Они облегчают обнаружение целевых последовательностей в образце.
- Оба типа зондов одинаково чувствительны и специфичны.
В чем разница между радиоактивными и нерадиоактивными зондами?
Радиоактивные зонды представляют собой последовательности одноцепочечной ДНК или РНК, помеченные радиоактивными изотопами, тогда как нерадиоактивные зонды представляют собой последовательности одноцепочечной ДНК или РНК, помеченные химической меткой. Итак, в этом ключевое различие между радиоактивными и нерадиоактивными зондами. Также опасны радиоактивные изотопы. Следовательно, радиоактивные зонды значительно опасны, а нерадиоактивные зонды не опасны.
Кроме того, еще одним отличием радиоактивных и нерадиоактивных зондов являются их недостатки. Короткие периоды полураспада и опасности, связанные с их производством, использованием и утилизацией, являются недостатками использования радиоактивных зондов. С другой стороны, этапы гибридизации ДНК с нерадиоактивными зондами обычно утомительны и требуют много времени.
Ниже на инфографике показано больше сравнений, связанных с разницей между радиоактивными и нерадиоактивными зондами.
Резюме – Радиоактивные и нерадиоактивные зонды
Зонд представляет собой фрагмент ДНК или РНК, содержащий нуклеотидную последовательность, комплементарную интересующей последовательности. Для обнаружения целевой последовательности зонды могут быть помечены радиоактивно, флуоресцентно или химически. Зонды связываются с комплементарными последовательностями в образце. Радиоактивные зонды метят радиоактивными изотопами, а нерадиоактивные зонды метят биотином, дигоксигенином или пероксидазой хрена. Таким образом, в этом ключевое различие между радиоактивными и нерадиоактивными зондами.
