Ключевое различие между трансляцией никеля и заполнением концов состоит в том, что трансляция никеля - это процесс, который создает меченые зонды ДНК для различных реакций гибридизации, в то время как заполнение концов - это метод, который создает затупленные фрагменты путем добавления нуклеотидов в одноцепочечные выступы.
Перевод никеля и заполнение конца - два метода, используемые в молекулярной биологии. Трансляция Nick используется для маркировки зондов для гибридизации с целью обнаружения определенных последовательностей нуклеотидов. Заполнение концов используется для изготовления затупленных фрагментов, которые имели липкие концы с однонитевыми выступами. Оба метода имеют большое значение, и они регулярно применяются в лабораториях молекулярных исследований.
Что такое Nick Translation?
Ник-трансляция является важным методом, используемым для подготовки меченых зондов для различных молекулярно-биологических методов, таких как блоттинг, гибридизация in situ, флуоресцентная гибридизация in situ и т. д. Это метод маркировки ДНК in vitro. ДНК-зонды используются для идентификации конкретных последовательностей ДНК или РНК. С помощью меченого зонда можно пометить или визуализировать определенные фрагменты из сложной смеси нуклеиновых кислот. Поэтому меченые зонды готовят с использованием различных методик. Трансляция Ника является одним из таких методов, который позволяет получать меченые зонды с помощью ферментов ДНКазы 1 и ДНК-полимеразы 1.
Рисунок 01: Перевод Ника
Процесс трансляции Nick начинается с активности фермента ДНКазы 1. ДНКаза 1 вносит разрывы в фосфатный остов двухцепочечной ДНК, расщепляя фосфодиэфирные связи между нуклеотидами. Как только разрыв будет создан, будет произведена свободная 3'-ОН группа нуклеотида, и на нее будет воздействовать фермент ДНК-полимераза 1. Экзонуклеазная активность ДНК-полимеразы 1 с 5' на 3' удаляет нуклеотиды из разрыва в направлении 3' цепи ДНК.
Одновременно с этим работает полимеразная активность фермента ДНК-полимеразы 1, который добавляет нуклеотиды взамен удаленных нуклеотидов. Если нуклеотиды помечены, замена произойдет на меченые нуклеотиды, и это пометит ДНК для идентификации. Наконец, эту вновь синтезированную меченую ДНК можно использовать в качестве зондов в различных реакциях гибридизации.
Что такое End Filling?
Концевое заполнение - это метод, используемый в молекулярной биологии для создания затупленных фрагментов. Рестрикционное пищеварение дает фрагменты с выступающими частями. Эти фрагменты могут быть несовместимы для лигирования в плазмидные векторы. Векторы часто затупляются, чтобы можно было соединить несовместимые концы. Следовательно, фрагменты с выступающими частями можно затупить, добавив нуклеотиды к комплементарной цепи, используя выступающие части в качестве матрицы для полимеризации. Этот процесс известен как заполнение концов.
ДНК-полимеразы, такие как фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I и ДНК-полимеразы Т4, катализируют заполнение концов. Они добавляют нуклеотиды, чтобы заполнить (5′ → 3′) и прожевать (3′ → 5′). Как только липкие концы заполнены, они становятся тупыми, и их можно лигировать в вектор.
Кроме того, заполнение концов можно использовать для маркировки молекул ДНК. Однако его можно использовать только для маркировки молекул ДНК с липкими концами. По сравнению с трансляцией ников, заполнение концов - более щадящий метод, который редко вызывает разрывы ДНК.
Каковы сходства между переводом никнейма и заполнением конца?
- И перевод никеля, и заполнение концов являются методами молекулярной биологии.
- Ими можно маркировать датчики.
- Оба находятся в пробирке
В чем разница между переводом никнейма и заполнением конца?
Трансляция Ника - это метод, который создает меченые зонды для гибридизации. Напротив, заполнение концов - это метод, при котором создаются тупые фрагменты для лигирования в векторы. Итак, в этом ключевое отличие перевода ника от заполнения конца. Кроме того, для трансляции Nick требуется использование экзонуклеазной активности с 5’ на 3’, в то время как заполнение концов не требует экзонуклеазной активности с 5’ на 3’.
В приведенной ниже инфографике более подробно представлены различия между переводом никнейма и заполнением конца.
Резюме – Перевод Ника и Концевое Заполнение
Ник-трансляция - это метод, при котором нуклеотиды, меченные радиоактивным изотопом, встраиваются в ДНК. Он синтезирует меченые зонды на основе активности ферментов ДНКазы 1 и ДНК-полимеразы 1 E. coli. С другой стороны, торцевое заполнение - это метод, при котором образуются тупые фрагменты. Когда фрагменты имеют липкие концы (одноцепочечные выступы), необходимо сделать их затупленными концами, чтобы лигировать в векторы. Заполнение концов добавляет совместимые нуклеотиды и создает фрагменты с тупыми концами, чтобы сделать их совместимыми для лигирования. Таким образом, это резюмирует разницу между переводом ника и заполнением конца.
