Ключевое различие между BL21 и DH5 Alpha заключается в том, что BL21 представляет собой генетически сконструированную компетентную клетку E. coli с дефицитом протеазы, используемую в основном для экспрессии белка, тогда как DH5 Alpha представляет собой генетически сконструированную компетентную клетку E. coli с мутацией recA1, используемую в основном для плазмидной трансформации.
Е. coli является одним из известных организмов выбора для производства рекомбинантного белка. За последние годы он стал самой популярной платформой для экспрессии. Он также используется как фабрика по производству клеток. BL21 и DH5 Alpha представляют собой две генно-инженерные клетки E. coli, используемые в настоящее время для экспрессии белков и трансформации плазмид соответственно.
Что такое BL21?
BL21 представляет собой генетически сконструированную компетентную клетку E.coli с дефицитом протеаз, используемую в основном для экспрессии белка. E. coli BL21 представляет собой бактериальную клетку, полученную из штамма B. Он имеет дефекты протеазы Lon и протеазы наружной мембраны ompT. Он обычно используется для экспрессии рекомбинантных белков, поскольку он обычно обеспечивает стабильность экспрессируемых белков. BL21 применим для экспрессии белка с ДНК pCold I-IV и ДНК pCold TF. Но эта компетентная клетка E. coli не предназначена для системы экспрессии белка с использованием промотора Т7, такой как система рЕТ. Причина этого в том, что BL21 не экспрессирует РНК-полимеразу Т7. Кроме того, не рекомендуется использовать для конструирования или приготовления плазмиды, так как она не имеет мутации recA.
Рисунок 01: BL21
BL21 был впервые описан Studier в 1986 году после различных модификаций линии B. В клетках BL21 отсутствует протеаза LON, которая расщепляет многие чужеродные белки. Кроме того, отсутствует еще один ген, кодирующий протеазу наружной мембраны (OmpT), функция которой заключается в деградации внеклеточных белков. Недостаток этих белков запускает успешную продукцию чужеродного белка в клетках E. coli BL21. Кроме того, мутация hsdSB в этих клетках предотвращает метилирование и разрушение чужеродной ДНК в клетках BL21.
Что такое DH5 Alpha?
DH5 Alpha представляет собой генетически сконструированную компетентную клетку E. coli с мутацией recA1, которая в основном используется для трансформации плазмиды. Клетки E. coli DH5 Alpha были генетически сконструированы американским биологом Дугласом Ханаханом для обеспечения максимальной эффективности трансформации. Альфа-клетка DH5 имеет три различные мутации: recA1, endA1 и lacZΔM15. recA1 представляет собой одноточечную мутацию, которая заменяет глицин 160 на остаток аспарагиновой кислоты в полипептиде recA. Эта мутация отключает активность рекомбиназ и инактивирует гомологичную рекомбинацию. Мутация endA1 инактивирует внутриклеточную эндонуклеазу, которая предотвращает деградацию встроенной плазмиды.
Рисунок 02: Альфа DH5
Кроме того, мутация lacZΔM15 позволяет проводить сине-белый скрининг трансформированных клеток. Эти клетки являются компетентными клетками. Их часто используют с трансформацией хлоридом кальция для вставки желаемой плазмиды. Недавнее исследование показало, что клетка DH5 Alpha с методом Ханахана была наиболее эффективной компетентной клеткой для плазмидной трансформации.
В чем сходство между BL21 и DH5 Alpha?
- BL21 и DH5 Alpha - две генно-инженерные E.coli
- Обе являются компетентными клетками.
- Они состоят из различных мутаций.
- У обоих нет естественной среды обитания.
- Они используются в лабораторных целях, таких как исследования экспрессии и процедуры клонирования.
В чем разница между BL21 и DH5 Alpha?
BL21 представляет собой генетически сконструированную компетентную клетку E. coli с дефицитом протеазы, которая в основном используется для экспрессии белка. С другой стороны, DH5 Alpha представляет собой генетически сконструированную компетентную клетку E. coli с мутацией recA1, которая в основном используется для трансформации плазмиды. Итак, в этом ключевое отличие BL21 от DH5 Alpha. Кроме того, клетка BL21 E. coli не имеет мутации recA1, в то время как клетка DH5 Alpha E. coli имеет мутацию recA1.
В следующей инфографике перечислены различия между BL21 и DH5 Alpha в табличной форме.
Резюме – BL21 против DH5 Alpha
Непатогенные штаммы кишечной палочки генетически разработаны учеными для лабораторных исследований экспрессии и целей клонирования. BL21 и DH5 Alpha представляют собой две генетически модифицированные клетки E. coli. BL21 в основном используется для исследований экспрессии белков. С другой стороны, DH5 Alpha в основном используется для целей трансформации плазмид. Таким образом, это краткое изложение различий между BL21 и DH5 Alpha.
