Ключевое различие между гель-фильтрацией и аффинной хроматографией заключается в том, что гель-фильтрационная хроматография зависит от различий в молекулярной массе или размере образца аналита, тогда как аффинная хроматография зависит от сродства аналита к иммобилизованному лиганду.
Термин хроматография в аналитической химии относится к процессу разделения компонентов в смеси с использованием различных методов. Хроматография - это собирательное название, которое представляет собой различное количество различных методов разделения.
Что такое гель-фильтрационная хроматография?
Гель-фильтрационная хроматография – это аналитический метод, в котором разделение компонентов зависит от разницы в молекулярном весе или размере. Этот метод также известен как эксклюзионная хроматография или молекулярно-ситовая хроматография. Техника разделения в этом процессе зависит от различной способности молекул в образце проникать в поры гель-фильтрационной среды.
В методе гель-фильтрации неподвижная фаза содержит шарики гидратированного губчатого материала с порами молекулярных размеров, охватывающими узкий диапазон размеров. Если пропустить через колонку с этими «молекулярными ситами» водный раствор, состоящий из молекул разного размера, то молекулы, размеры которых превышают размер пор фильтрующей среды, быстро проходят через колонку. Напротив, более мелкие молекулы проникают в поры геля и имеют тенденцию медленно перемещаться по колонке. Молекулы элюируются из колонки в порядке уменьшения молекулярного размера. Здесь пределом запрета геля является молекулярная масса мельчайших молекул, не способных проникнуть в поры данного геля.
Существуют различные типы методов гель-фильтрации, такие как метод непрямой гель-фильтрации, стационарная гель-фильтрация, диализ на гелевых шариках и т. д. Непрямая гель-фильтрационная хроматография полезна для определения свободных гормонов щитовидной железы. Стационарная гель-фильтрационная хроматография является непрямым методом, используемым в основном для измерения свободных стероидов, таких как кортизол, тестостерон и т. д. С другой стороны, гель-диализ представляет собой сравнительно более простую модификацию стационарной гель-фильтрации.
Что такое аффинная хроматография?
Аффинная хроматография - это аналитический метод и метод разделения, который зависит от специфического связывающего взаимодействия между иммобилизованным лигандом и его партнером по связыванию. Некоторые примеры включают связывание антитело-антиген, связывание фермент-субстрат и связывание фермент-ингибитор. Таким образом, этот метод имеет много важных применений при очистке нуклеиновых кислот, очистке белков из клеточных экстрактов и очистке крови.
В этой методике наиболее важным свойством является иммобилизация лиганда. Для этого мы можем использовать различные материалы, такие как акрилаты и силикагель. Важно предотвратить стерическую интерференцию молекулы-мишени с лигандом. Кроме того, к твердой фазе присоединен ингибитор. Мы называем этот ингибитор спейсером. Классически спейсер состоит из углеводородной цепи.
Неподвижная фаза аффинной хроматографии содержит ядро, спейсер и лиганд. Иногда он также имеет ион металла, связанный с лигандом. Наиболее предпочтительной твердой фазой для стационарной фазы в этом методе является гель агарозы, потому что он легко дозируется, чтобы заполнить и заполнить колонку слоями смолы любого размера, и он достаточно велик для того, чтобы биомолекулы могли свободно проникать в шарики и проходить через них. Лиганды могут ковалентно присоединяться к гранулированному полимеру различными способами. Наиболее распространенными спейсерными соединениями являются бромид циана, эпоксид, эпоксид с кислотой С6 и диамин. С другой стороны, лиганд, который мы можем использовать, различается в зависимости от мишени, например, антитело-антиген, ионы железа или алюминия-фосфопротеины, авидин-биотин, глутатион-GST, хелатор-His-меченые белки и т. д.
В чем разница между гель-фильтрацией и аффинной хроматографией?
Хроматография является важным аналитическим методом. Гель-фильтрационная хроматография и аффинная хроматография являются двумя важными вариантами хроматографии. Ключевое различие между гель-фильтрацией и аффинной хроматографией заключается в том, что гель-фильтрационная хроматография зависит от различий в молекулярной массе или размере образца аналита, тогда как аффинная хроматография зависит от аффинности аналита к иммобилизованному лиганду.
Резюме – Сравнение гель-фильтрации и аффинной хроматографии
Существуют различные типы хроматографических методов в зависимости от их применения и природы анализируемого образца. Гель-фильтрация и аффинная хроматография являются двумя такими методами. Ключевое различие между гель-фильтрацией и аффинной хроматографией заключается в том, что гель-фильтрационная хроматография зависит от различий в молекулярной массе или размере образца аналита, тогда как аффинная хроматография зависит от сродства аналита к иммобилизованному лиганду..
