Ключевая разница - окрашивание по Граму против кислотостойкой
Бактерии – это очень маленькие микроорганизмы. Они прозрачны, и их обнаружение затруднено в живых и неокрашенных условиях. Таким образом, разработаны различные методы окрашивания, облегчающие обнаружение бактерий. Существует три основных типа методов окрашивания: простое окрашивание, дифференциальное окрашивание и структурное окрашивание. Дифференциальное окрашивание - это метод, в котором для дифференциации бактерий используется более одного красителя. Окрашивание по Граму и кислотоустойчивое окрашивание наиболее широко известны как дифференциальные окрашивания. Окрашивание по Граму - это метод дифференциального окрашивания, который разделяет бактерии на две группы, известные как грамположительные бактерии и грамотрицательные бактерии. Кислотоустойчивый краситель - это дифференциальный краситель, используемый для идентификации кислотоустойчивых организмов, таких как микобактерии, от некислотоустойчивых организмов. В этом ключевое различие между окрашиванием по Граму и кислотоустойчивым окрашиванием.
Что такое окрашивание по Граму?
Окрашивание по Граму - важный метод дифференциального окрашивания, используемый для идентификации бактерий в микробиологии. Этот метод был представлен датским бактериологом Гансом Кристианом Грамом в 1884 году. Окрашивание по Граму разделяет бактерии на две основные группы, называемые грамположительными и грамотрицательными, которые очень важны для классификации и идентификации бактерий. Микробиологи выполняют окрашивание по Граму в качестве начального шага в характеристике бактерий во время своих исследований.
Бактерии сгруппированы на основе различий в их клеточной стенке. Грамположительные бактерии состоят из толстого слоя пептидогликана в их клеточной стенке, в то время как грамотрицательные бактерии состоят из тонкого слоя пептидогликана в их клеточной стенке. Результат окрашивания по Граму будет основываться на разнице в толщине пептидогликанового слоя клеточной стенки.
Окрашивание по Граму выполняется с использованием четырех различных реагентов, а именно; первичное пятно, морилка, обесцвечивающий агент и встречное пятно. Кристаллический фиолетовый и сафранин используются в качестве основных красителей и красителей, соответственно, а граммы йода и 95% спирта используются в качестве протравы и обесцвечивателя соответственно. Основные этапы окрашивания по граммам следующие:
- Мазок бактерий готовят на чистом предметном стекле, фиксируют нагреванием и охлаждают.
- Мазок заливают кристаллическим фиолетовым на 1-2 минуты.
- Мазок промывается медленно проточной водой из-под крана, чтобы удалить излишки пятен.
- Грамм йода наносят на мазок на 1 минуту.
- Мазок промывается медленно проточной водопроводной водой
- Мазок промывают 95% спиртом в течение 2 – 5 секунд и ополаскивают медленно проточной водопроводной водой.
- Мазок докрашивают сафранином в течение 1 минуты
- Мазок промывают медленно проточной водопроводной водой, высушивают и исследуют под микроскопом.
В конце окрашивания по Граму грамотрицательные бактерии будут окрашены в розовый цвет, а грамположительные бактерии – в фиолетовый цвет.
Рисунок 01: Грамотрицательные и грамположительные бактерии
Результат окраски по грамму определяется толщиной слоя пептидогликана в их клеточной стенке. На этапе обесцвечивания первичный краситель и протрава легко удаляются с грамотрицательных бактерий и обесцвечиваются, поскольку они имеют тонкий слой пептидогликана. Первичное окрашивание сохраняется у грамположительных бактерий, поскольку они имеют толстый пептидогликановый слой. Встречное окрашивание не будет эффективным для грамположительных бактерий из-за сохранения основного окрашивания. Таким образом, грамположительные бактерии будут видны в основном цвете пятна, т. е. в пурпурном цвете. Встречный краситель будет окрашивать грамотрицательные бактерии, и они будут видны в пиковом цвете, то есть в цвете сафранина. Следовательно, с помощью окрашивания по Граму легко разделить бактерии на две группы, и это полезно для дифференциации и идентификации бактерий.
Что такое кислотный пост?
Кислотостойкость – это физическое свойство некоторых бактерий, а именно их устойчивость к обесцвечиванию кислотами в процессе окрашивания. После окрашивания эти микроорганизмы устойчивы к процедурам обесцвечивания на основе разбавленной кислоты или этанола, обычным для многих протоколов окрашивания. Таким образом, эти организмы получили название «кислотный пост». Это свойство проявляется из-за высокого уровня воскообразного материала (миколовых кислот) в их клеточных стенках. Этот тест имеет решающее значение для выявления Mycobacterium tuberculosis.
Рисунок 2: Кислотоустойчивые микобактерии
Это кислотостойкое окрашивание было разработано Паулем Эрлихом в 1882 году. Кислотоустойчивый метод Эрлиха был модифицирован Цилем-Нильсеном, и в настоящее время он используется чаще. Процедура кислотно-быстрого окрашивания включает три разных реагента. Карбол-фушин используется в качестве основного красителя. В качестве обесцвечивающего агента используется кислый спирт. Метиленовый синий используется в качестве контрастного красителя. Процедура окрашивания проводится следующим образом.
- Первичный краситель (карболовый фуксин) наносится на фиксированный образец на предметном стекле (все клетки окрашиваются в красный цвет).
- Слайд прогревается паром в течение 5 минут, благодаря чему красители должным образом вгоняются в клетки.
- Затем добавляется раствор для обесцвечивания (это удаляет красный краситель из всех клеток, кроме кислотоустойчивых бактерий).
- Метиленовый синий добавляется в качестве контрастного красителя (окрашивает все обесцвеченные бактериальные клетки).
- Кислотоустойчивые бактерии остаются красными, в то время как некислотоустойчивые бактерии окрашиваются в синий цвет.
Каковы сходства между окрашиванием по Граму и кислотным голоданием?
- Окрашивание по Граму и Кислотное быстрое окрашивание - это два дифференциальных метода окрашивания.
- Оба метода разделяют бактерии на две группы.
- В обеих техниках используется два окрашивания и одно обесцвечивание.
В чем разница между окрашиванием по Граму и кислотным голоданием?
Окрашивание по Граму против кислотного голодания |
|
| Окрашивание по Граму - это метод дифференциального окрашивания, который разделяет бактерии на две группы: грамположительные бактерии и грамотрицательные бактерии. | Окрашивание кислотоустойчивых - это дифференциальное окрашивание, используемое для идентификации кислотоустойчивых организмов от некислотоустойчивых организмов. |
| Первичное окрашивание | |
| Кристаллический фиолетовый обычно используется для окрашивания по Граму. | Карбол-фуксин является основным красителем, используемым при кислотном голодании. |
| Обесцвечивающий агент | |
| 95% спирт используется в качестве обесцвечивающего агента при окраске по Граму. | Кислотный спирт используется в качестве обесцвечивающего агента при кислотном голодании. |
| Встречное окрашивание | |
| Окрашивание по Граму использует сафранин в качестве контрастного окрашивания. | Кислотно-стойкий краситель использует метиленовый синий в качестве контркрасителя. |
| Наблюдение | |
| Грамотрицательные бактерии отмечены пиковым цветом, а грамположительные бактерии – фиолетовым цветом. | Кислотоустойчивые бактерии отмечены красным цветом, а некислотоустойчивые бактерии – синим цветом. |
Резюме – Окрашивание по Граму против кислотного голодания
Визуализация микроорганизмов в живом состоянии затруднена. Поэтому биологические красители и процедуры окрашивания широко используются для изучения их свойств. Дифференциальное окрашивание - это один из методов окрашивания, используемый для дифференциации бактерий. Окрашивание по Граму и кислотоустойчивое окрашивание представляют собой два дифференциальных метода окрашивания. Окрашивание по Граму позволяет дифференцировать грамотрицательные и грамположительные бактерии по толщине их клеточных стенок. Кислотоустойчивое окрашивание позволяет отличить кислотоустойчивые бактерии от некислотоустойчивых бактерий на основе содержания миколовой кислоты в клеточной стенке. В этом разница между кислотоустойчивым окрашиванием и окрашиванием по Граму.
Загрузить PDF-версию книги Окрашивание по Граму против кислотного голодания
Вы можете загрузить PDF-версию этой статьи и использовать ее в автономном режиме в соответствии с примечанием к цитированию. Пожалуйста, загрузите PDF-версию здесь. Разница между окрашиванием по Граму и кислотоустойчивостью.
