Ключевая разница – нитроцеллюлоза против ПВДФ
Вестерн-блоттинг - это метод, который позволяет обнаруживать и количественно определять определенные белки в образце белка. Надежность методики зависит от выбора правильной мембраны для поглощения белков из геля. Существуют различные типы микропористых мембран. Мембраны из нитроцеллюлозы и ПВДФ являются двумя такими мембранами, которые исследователи предпочитают из-за их особых свойств по сравнению с другими типами мембран. Выбор между нитроцеллюлозой или ПВДФ также является еще одной проблемой вестерн-блоттинга. И нитроцеллюлоза, и PVDF обладают высокой способностью поглощать белок. Ключевое различие между нитроцеллюлозной и ПВДФ-мембраной заключается в том, что нитроцеллюлозные мембраны не могут удалять антитела и повторно использовать мембрану для повторного зондирования антител, в то время как ПВДФ-мембраны могут удалять и повторно использовать.
Что такое нитроцеллюлоза?
Нитроцеллюлоза представляет собой полимер, получаемый путем обработки целлюлозы азотной кислотой, и используется для изготовления микропористых мембран в молекулярной биологии, особенно для методов блоттинга, таких как саузерн-, нозерн- и вестерн-блоттинг. Размеры пор нитроцеллюлозных мембран составляют от 3 до 20 мкм. Нитроцеллюлозные микропористые мембраны облегчают обнаружение иммунохимической реакции, происходящей на поверхности мембраны. Поэтому нитроцеллюлозные мембраны часто используются для иммобилизации белков и обнаружения специфических белков в вестерн-блоттинге. Нитроцеллюлозные мембраны также могут иммобилизовать гликопротеины и нуклеиновые кислоты.
Нитроцеллюлозные мембраны предпочтительны для анализа бокового потока из-за нескольких особенностей. Нитроцеллюлозные мембраны поглощают белки в высокой концентрации. Растворитель, используемый для смачивания мембраны, не снижает абсорбцию белка нитроцеллюлозной мембраны. Нитроцеллюлозные мембраны можно легко разрезать до желаемого размера геля и переносить белки из геля на мембрану с помощью электрического или капиллярного переноса. Нитроцеллюлоза обеспечивает более быстрый поток белков через мембрану с высоким потенциалом связывания. Нитроцеллюлоза показывает повышенную прочность при обращении. Еще одним особым свойством нитроцеллюлозной мембраны является то, что ее можно легко приклеить водостойкими клеями, не содержащими растворителей, на различные пластиковые основы.
Рисунок 01: Нитроцеллюлозная мембрана для вестерн-блоттинга
Что такое ПВДФ?
Поливинилидендифторид (ПВДФ) представляет собой фторполимер, полученный полимеризацией винилидендифторида и обладающий высокой способностью иммобилизовать белки. Поэтому микропористые мембраны из ПВДФ используются в методах вестерн-блоттинга для анализа специфических белков из смесей белков. Мембраны PVDF также можно использовать для анализа аминокислот и секвенирования белков. Самая важная характеристика мембраны PVDF по сравнению с нитроцеллюлозной мембраной заключается в том, что с нее можно легко снять антитела и повторно использовать для последующих зондов антител.
ПВДФ мембраны толще, чем нитроцеллюлозные мембраны; следовательно, более устойчивы к повреждениям при повторном использовании. Мембраны PVDF обладают высокой гидрофобностью. Поэтому перед использованием их необходимо замочить в метаноле или изопропаноле.
В чем разница между нитроцеллюлозой и PVDF?
Нитроцеллюлоза против ПВДФ |
|
| Нитроцеллюлоза представляет собой полимер, состоящий из целлюлозы. | ПВДФ представляет собой фторполимер, полученный полимеризацией винилидендифторида. |
| Размер пор мембраны | |
| Обычные размеры пор: 0,1, 0,2 или 0,45 мкм | Обычные размеры пор: 0,1, 0,2 или 0,45 мкм |
| Связывающая способность белков | |
| Нитроцеллюлоза имеет способность связывать белок от 80 до 100 мкг/см2. | ПВДФ обладает способностью связывать белок от 170 до 200 мкг/см2. |
| Чувствительность | |
| Имеет низкую чувствительность по сравнению с PVDF. | Высокая чувствительность. |
| Обнаружение белков с низкой экспрессией | |
| Поскольку чувствительность нитроцеллюлозных мембран низкая, они не подходят для обнаружения низкоэкспрессируемых белков. | Этот метод больше подходит для обнаружения белков с низкой экспрессией из-за его высокой чувствительности. |
| Фоновый шум | |
| Это имеет более низкий фоновый шум | Это имеет более высокий фоновый шум. |
| Взаимодействия с белками | |
| Белковые молекулы связываются с нитроцеллюлозными мембранами посредством гидрофобных взаимодействий. | Белки связываются с мембранами PVDF посредством гидрофобных и дипольных взаимодействий. |
| Природа мембраны | |
| Нитроцеллюлоза хрупкая и хрупкая. Однако доступны версии из нитроцеллюлозы, и они устойчивы. | ПВДФ более прочный и имеет более высокую химическую стойкость. |
| Возможность разделять и повторно использовать | |
| Нитроцеллюлоза может иметь трудности с зачисткой и повторным зондированием без потери сигнала. | ПВДФ идеально подходит для повторного измерения и секвенирования. |
| Пригодность | |
| Нитроцеллюлоза идеально подходит для обнаружения низкомолекулярных белков. | ПВДФ больше подходит для обнаружения белков с более высокой молекулярной массой. |
| Другое использование | |
| Нитроцеллюлоза может использоваться для анализа нуклеиновых кислот и дот/слот-блоттинга. | ПВДФ можно использовать для секвенирования белков и систем твердофазного анализа. |
| Стоимость | |
| Это дешевле, чем мембраны PVDF. | Это дороже нитроцеллюлозных мембран. |
| Необходимо предварительное смачивание | |
| Нитроцеллюлозные мембраны не требуют предварительной пропитки метанолом | ПВДФ мембраны требуют предварительной пропитки метанолом. |
Резюме – Сравнение нитроцеллюлозы и ПВДФ
Нитроцеллюлозные мембраны были первыми мембранами, которые использовались в коммерческих целях для анализа латерального потока. Они обладают высокой способностью поглощать белки. Поэтому в вестерн-блоттинге используют нитроцеллюлозные мембраны. PVDF - это еще один тип мембран, используемых в вестерн-блоттинге, который также обладает высокой способностью поглощать белок. Оба типа используются в вестерн-блоттинге для анализа белков. Однако мембраны из ПВДФ обладают более особыми свойствами, что делает их более подходящими для вестерн-блоттинга, чем нитроцеллюлозные мембраны. Но нитроцеллюлозные мембраны больше подходят для обнаружения низкомолекулярных белков, мембраны PVDF больше подходят для обнаружения высокомолекулярных белков. В этом разница между нитроцеллюлозными и PVDF мембранами.
