Ключевая разница - нитроцеллюлоза против нейлоновой мембраны
Блоттинг - важный метод обнаружения специфических последовательностей ДНК, РНК и белков из их смесей в молекулярной биологии. Это делается с помощью мембраны, называемой блот. Существуют различные методы блоттинга, такие как северный, южный и вестерн-блоттинг. Следует тщательно выбирать подходящую мембрану для процесса блоттинга, чтобы предотвратить неспецифическое связывание и неправильное обнаружение. Мембраны из нитроцеллюлозы, нейлона и ПВДФ обычно используются в методах блоттинга. У них разные характеристики. Ключевое различие между нитроцеллюлозой и нейлоновой мембраной заключается в том, что нитроцеллюлозные мембраны обладают высоким потенциалом иммобилизации белка, тогда как нейлоновые мембраны имеют высокий потенциал иммобилизации нуклеиновых кислот. Однако оба типа мембран часто используются в методах блоттинга.
Что такое нитроцеллюлозная мембрана?
Нитроцеллюлозная мембрана является широко используемым мембранным фильтром в методах блоттинга нуклеиновых кислот и белков. Обладает высоким потенциалом связывания с белками. Таким образом, нитроцеллюлозные мембраны широко используются в технике вестерн-блоттинга. Нитроцеллюлозные мембраны совместимы со всеми методами гибридизации и демонстрируют превосходную связывающую способность без помех. Нитроцеллюлозные мембраны по своей природе гидрофильны. Они гидрофильно взаимодействуют с молекулами и эффективно иммобилизуют их на мембране. Коммерческие нитроцеллюлозные мембраны доступны с двумя размерами пор: 0,45 и 0,2 мкм.
Рисунок 01: Нитроцеллюлозная мембрана, используемая в вестерн-блоттинге
Что такое нейлоновая мембрана?
Нейлоновая мембрана - еще один тип коммерческой мембраны, используемой в методах блоттинга. В качестве альтернативы он используется с нитроцеллюлозными мембранами для саузерн- и нозерн-блоттинга. Нейлоновые мембраны лучше подходят для саузерн-блоттинга, чем нитроцеллюлозные, благодаря их высокому сродству к связыванию с ДНК. Из-за нескольких уникальных особенностей нейлоновых мембран исследователи обычно используют нейлоновые мембраны для саузерн- и нозерн-блоттинга вместо нитроцеллюлозной мембраны. Нейлоновые мембраны также рекомендуются для зачистки и повторного зондирования, в отличие от нитроцеллюлозных.
Рисунок 02: Нейлоновая мембрана, используемая для саузерн-блоттинга
В чем разница между нитроцеллюлозой и нейлоновой мембраной?
Нитроцеллюлоза против нейлоновой мембраны |
|
| Нитроцеллюлозные мембраны хрупкие. | Нейлоновые мембраны менее хрупкие. |
| Обработка | |
| С ними трудно справиться. | С ними легко обращаться. |
| Осуждение | |
| Нитроцеллюлозные мембраны без подложки трудно повторно исследовать. | Повторное зондирование с нейлоновыми мембранами упрощается. |
| Совместимость с различными условиями хранения | |
| Нитроцеллюлозные мембраны обладают меньшей прочностью, чтобы выдерживать различные условия хранения. | Нейлоновые мембраны более устойчивы к различным условиям хранения. |
| Использовать | |
| Требуется предварительное смачивание. | Предварительное смачивание нейлоновых мембран не требуется. |
| Гидрофильная природа | |
| Нитроцеллюлозные мембраны гидрофильны по своей природе, но менее гидрофильны, чем нейлоновые мембраны. | Они очень гидрофильны по своей природе. |
| Потенциал иммобилизации | |
| Нитроцеллюлозные мембраны имеют меньшее сродство к нуклеиновым кислотам. Но он имеет высокое сродство к белкам. | Нейлоновые мембраны обладают более высоким потенциалом связывания с нуклеиновыми кислотами, чем нитроцеллюлозные мембраны. |
Резюме – Нитроцеллюлоза против нейлоновой мембраны
Нитроцеллюлозные и нейлоновые мембраны представляют собой специальные листы, используемые в технике блоттинга для воспроизведения рисунка полос на геле. Они дают возможность детектировать определенную последовательность или белок из смесей путем их иммобилизации на мембране. Как только молекулы иммобилизованы на мембране, ее можно использовать в качестве субстрата для гибридизационного анализа с мечеными зондами. Нитроцеллюлозная мембрана обычно используется для обнаружения белков в методе вестерн-блоттинга из-за ее высокой аффинности связывания с белками. Нейлоновые мембраны часто используются для саузерн- и нозерн-блоттинга. В этом разница между нитроцеллюлозой и нейлоновой мембраной.
