Ключевая разница – прямой и непрямой ИФА
Иммуноферментный анализ (ELISA), также известный как иммуноферментный анализ, представляет собой серологический тест, выявляющий антитела в крови. Он используется в качестве диагностического инструмента, чтобы выяснить, подвергался ли пациент воздействию определенного типа вируса или другого инфекционного агента (антигена) и вырабатывал ли организм антитела против инфекции. ELISA также может идентифицировать прошлые и текущие инфекции. Следовательно, ИФА часто используется врачами в качестве предварительного скрининга перед углубленным анализом заболеваний. Этот тест можно провести в лаборатории, взяв образец крови у пациента. Существует два типа теста ELISA: прямой ELISA и непрямой ELISA. Основное различие между прямым и непрямым ИФА заключается в том, что непрямой ИФА более чувствителен и требует добавления вторичного антитела, в то время как прямой ИФА менее чувствителен и использует только первичное антитело.
Что такое прямой ИФА?
ИФА - это диагностический тест, который проводится для определения наличия определенных антигенов или антител в крови. Это делается как анализ планшета. Он использует антитела, связанные с легко анализируемыми ферментами. Присутствие антигенов в образце сыворотки связывается со специфическими антителами, связанными с ферментами. На заключительном этапе добавляется определенный субстрат для реакции с ферментом. Фермент превращает субстрат в окрашенный или продуцирующий сигнал продукт. Изменение цвета химического субстрата указывает на присутствие определенного антитела в образце сыворотки. В прямом тесте ELISA используются только первичные антитела, связанные с ферментом. При связывании с антигеном быстро меняет окраску, что свидетельствует о наличии в крови инфекционного агента. Однако интенсивность сигналов слабее в прямом ELISA, поскольку эпитопы ограничиваются связыванием антигенов. Следовательно, прямой ИФА менее чувствителен по сравнению с непрямым ИФА.
Рисунок 01: Прямой тест ELISA
Что такое непрямой ИФА?
ELISA можно проводить с использованием двух типов антител, а именно; первичное антитело и вторичное антитело. Инструмент непрямого ELISA использует оба типа антител для усиления сигналов для лучшего обнаружения. Непрямой метод ELISA выполняется следующим образом.
- Планшеты инкубируют с антигенами и промывают для блокирования неспецифического связывания.
- Затем добавляют и промывают первичные антитела.
- Вторичные антитела, связанные с ферментом, добавляют и промывают.
- Добавляют субстрат и дают ему прореагировать с ферментами.
- Выявляются сигналы и идентифицируется наличие или отсутствие специфического антигена в образце.
В непрямом тесте ELISA несколько вторичных антител могут связываться с одним первичным антителом. Вторичные антитела связаны с легко анализируемыми ферментами. Следовательно, одно связывание может дать сильный сигнал из-за более чем одного взаимодействия. Следовательно, непрямой ИФА более чувствителен, чем прямой ИФА. Однако непрямой ИФА может давать неспецифические сигналы из-за перекрестных реакций вторичных антител.
Рисунок 02. Непрямой ИФА-тест
В чем разница между прямым и непрямым ИФА?
Прямой и непрямой ИФА |
|
| Прямой ИФА менее чувствителен по сравнению с непрямым ИФА. | Непрямой ИФА более чувствителен. |
| Время потрачено | |
| Прямой ИФА-тест – это быстрый процесс. | Непрямой ИФА занимает много времени. |
| Использование антител | |
| Только один тип антител (первичные антитела) используется в прямом ИФА. | Первичные и вторичные антитела используются для непрямого ИФА. |
| Связь с ферментами | |
| Первичные антитела связаны с ферментами. | Вторичные антитела связаны с ферментами. |
| Перекрестная реактивность вторых антител | |
| Прямой ИФА исключает перекрестную реактивность вторых антител. | На непрямой ИФА влияет перекрестная реактивность вторых антител. |
| Сигналы | |
| Сигналы слабее по сравнению с непрямым ИФА. | Сигналы усиливаются в непрямом ИФА. Следовательно, его легко обнаружить. |
Резюме – Прямой и непрямой ИФА
ELISA - это биохимический метод, используемый в основном в иммунологии для обнаружения присутствия антител или антигенов в образце крови пациента. Это может быть выполнено с помощью двух процессов, известных как прямой или непрямой ИФА. Прямой тест ELISA использует только первичные антитела для обнаружения антигена, в то время как непрямой ELISA использует как первичные, так и вторичные антитела. В прямом ИФА метят первичные антитела, тогда как в непрямом ИФА метят вторичные антитела. В этом разница между прямым и непрямым ИФА.
