Ключевое различие между GFP и EGFP заключается в том, что GFP представляет собой белок дикого типа, включенный в процесс молекулярного клонирования клеток немлекопитающих, в то время как EGFP представляет собой улучшенный или сконструированный тип GFP, который можно использовать на клетках млекопитающих..
Молекулярное клонирование - передовая технология, которую ученые активно используют для экспрессии белков с помощью рекомбинантной технологии. В технологии рекомбинантной ДНК необходимо успешно трансформировать рекомбинантный вектор в организм-хозяин. Следовательно, в процессе трансформации следует идентифицировать и подтвердить, трансформировался ли интересующий ген в хозяина или нет. Чтобы оценить это, молекулярные биологи применяют несколько методов. Одним из этих методов является репортерный ген. Эти репортерные гены действуют как селектируемые маркеры для выбора правильных трансформантов. Таким образом, зеленый флуоресцентный белок (GFP) и усиленный зеленый флуоресцентный белок (EGFP) являются двумя репортерными белками, используемыми в молекулярном клонировании.
Что такое GFP?
GFP представляет собой белок дикого типа, который содержит 238 аминокислотных остатков и несколько выбираемых областей аминокислотных последовательностей, которые отличают его от других флуоресцентных белков. Кроме того, этот белок дикого типа первоначально был выделен из Aequorea Victoria; вид медузы. Однако в природных явлениях медуза могла производить флуоресценцию зеленого цвета в ответ на определенные раздражители.
Ранее эта концепция удивила ученых, и они решили использовать ее в своих технологиях рекомбинантной ДНК. Следовательно, ученые использовали эту мутантную форму гена дикого типа в качестве репортерного гена в своих исследованиях экспрессии генов. Ген GFP дикого типа способен продуцировать белок, который дает флуоресценцию при комнатной температуре или в УФ-свете. Следовательно, при вставке в трансформанты он экспрессируется и вызывает флуоресценцию. Если флуоресценция возникает после процесса трансформации, это подтверждает успех процесса трансформации. Проще говоря, эмиссия флуоресценции сигнализирует об успешной трансформации вектора, несущего интересующий ген, в хозяина.
Рисунок 01: GFP
По этой причине GFP действует как маркер экспрессии генов in vivo. В настоящее время для получения GFP используются методы генной инженерии. Кроме того, доступно множество улучшенных версий GFP, таких как EGFP. Следовательно, это позволяет эффективно использовать GFP в исследованиях молекулярного клонирования и экспрессии генов.
Что такое EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein или EGFP - это улучшенная версия GFP. Проще говоря, мы можем определить EGFP как модифицированную версию GFP дикого типа. Когда ген дикого типа GFP мутирует, это оказывает благотворное влияние. Следовательно, мутированный ген GFP позволяет проявлять новые признаки, и в результате мы можем производить Enhanced GFP с улучшенными характеристиками. Кроме того, мы можем успешно ввести мутации в ген GFP дикого типа, используя облучение или химические методы. Затем эти мутировавшие гены производят EGFP, обладающий более полезными характеристиками.
Рисунок 02: EGFP
Улучшенные характеристики EGFP:
- Способны излучать более сильные флуоресцентные сигналы.
- Имеет высокую чувствительность.
- Можно использовать его на клетках млекопитающих вместо прокариот и других эукариот более низкого уровня.
- Также обеспечивает повышенную чистоту продукта.
Поэтому, по сравнению с GFP, EGFP является предпочтительным выбором для исследований экспрессии генов. Однако продукт дороже по сравнению с GFP.
Каковы сходства между GFP и EGFP?
- GFP и EGFP - это два белка, обладающих способностью излучать зеленый цвет
- Поэтому оба функционируют как репортерные белки в исследованиях экспрессии генов.
- Кроме того, их можно синтезировать с использованием технологии рекомбинантной ДНК.
- Более того, эти два типа легко мутировать для синтеза улучшенных форм.
В чем разница между GFP и EGFP?
Репортерный ген - это ген, который присоединяется к интересующему гену в технологии рекомбинантной ДНК. Это сигнализирует об успешной трансформации рекомбинантного вектора в хозяина. Здесь GFP и EGFP представляют собой два типа зеленых флуоресцентных белков, которые работают как репортерные белки. Однако ключевое различие между GFP и EGFP заключается в том, что GFP является диким типом, а EGFP - модифицированной версией GFP. Кроме того, EGFP обладает более полезными характеристиками, чем GFP. Например, EGFP производит более сильный флуоресцентный свет и более чувствителен, чем GFP. Еще одно различие между GFP и EGFP - это системы, в которых мы можем их использовать. Системы, не относящиеся к млекопитающим, используют GFP, в то время как системы млекопитающих используют EGFP.
Приведенная ниже инфографика представляет разницу между GFP и EGFP в табличной форме.
Резюме – GFP против EGFP
GFP и EGFP являются репортерными белками в исследованиях молекулярного клонирования и экспрессии генов. GFP представляет собой белок дикого типа, представляющий собой зеленый флуоресцентный белок. Первоначально белок был выделен из медузы Aequorea victoria. Напротив, EFGP представляет собой улучшенную форму белка GFP. Это мутант дикого типа с улучшенными характеристиками. Следовательно, EFGP имеет более высокую мощность сигнала и более высокую чувствительность. Следовательно, мы можем использовать его на переносчиках млекопитающих. Напротив, GFP используется в основном только для переносчиков, не относящихся к млекопитающим. В целом, это разница между GFP и EGFP.
