Ключевое различие между хроматофокусированием и изоэлектрофокусированием заключается в том, что хроматофокусирование - это тип метода колоночной хроматографии, в котором используются ионообменные смолы, а изоэлектрофокусирование - это тип метода электрофореза, в котором используются иммобилизованные гели с градиентом рН.
Хроматофокусировка и изоэлектрическая фокусировка - это два метода, которые разделяют белки в соответствии с их изоэлектрическими точками. И хроматофокусировка, и изоэлектрическая фокусировка обладают большой разрешающей способностью. Хроматофокусирование - это метод колоночной хроматографии с высоким разрешением, а изоэлектрическое фокусирование - это метод электрофоретического разделения. Кроме того, для хроматофокусировки не используется электрическое поле, а для изоэлектрической фокусировки требуется электрическое поле.
Что такое хроматофокусировка?
Хроматофокусирование - это тип хроматографии с высоким элюированием, при котором белки разделяются в соответствии с различиями в их изоэлектрической точке. В нем используется колонка с ионообменной смолой и внутренний градиент pH. В отличие от изоэлектрической фокусировки, при хроматофокусировке не используется электрическое поле. Хроматофокусировка - это мощный метод очистки, который позволяет разделить очень похожие молекулы, даже отличающиеся всего на 0,02 единицы рН. Таким образом, хроматофокусировка лучше всего подходит в качестве заключительного этапа полировки, когда требуется высокое разрешение для разделения очень похожих компонентов.
При хроматофокусировании образец наносится на колонку путем смешивания его со стартовым буфером. Белки, рН которых выше их изоэлектрической точки, заряжены отрицательно и остаются в верхней части колонки, в то время как другие белки, рН которых ниже их изоэлектрической точки, мигрируют вниз по колонке. Белок с самой высокой изоэлектрической точкой элюируется первым, а белок с самой низкой изоэлектрической точкой элюируется из колонки последним. На этот метод влияют несколько факторов, таких как осаждение белка и линейность градиента pH.
Что такое изоэлектрическая фокусировка?
Изоэлектрическое фокусирование - это метод разделения различных молекул на основе их изоэлектрической точки. Он также известен как электрофокусировка. Этот метод часто используется для разделения белков в геле. При изоэлектрическом фокусировании образец добавляют в гели с иммобилизованным градиентом pH (IPG). Гель IPG представляет собой матрицу акриламидного геля, сополимеризованную с градиентом pH. Белки мигрируют к катоду, пока не найдут область рН своих изоэлектрических точек. Когда белок достигает pH, при котором нет суммарного заряда, миграция прекращается и появляется стационарная полоса. Точно так же каждый белок дает полосу в точке градиента pH, соответствующей его изоэлектрической точке.
Рисунок 01: Изоэлектрическая фокусировка
Изоэлектрическое фокусирование является первым этапом двумерного гель-электрофореза. В этом методе белки сначала разделяются в соответствии с их изоэлектрическими точками с помощью изоэлектрического фокусирования, а затем разделяются по их молекулярной массе с помощью SDS-PAGE..
Каковы сходства между хроматофокусировкой и изоэлектрической фокусировкой?
- Хроматофокусировка и изоэлектрическая фокусировка - два высокоразрешающих метода.
- Оба основаны на изоэлектрической точке белков.
- Эти методы используют градиент pH.
- Обе процедуры информативны для характеристики вариантов гемоглобина человека.
- Они могут разделять молекулы, значения pI которых отличаются всего на 0,02 единицы pH.
В чем разница между хроматофокусировкой и изоэлектрической фокусировкой?
Хроматофокусирование - это метод колоночной хроматографии с высоким разрешением, который разделяет белки в соответствии с их изоэлектрической точкой. Напротив, изоэлектрическое фокусирование представляет собой метод электрофореза, который разделяет белки в соответствии с их изоэлектрической точкой путем приложения электрического поля вдоль градиента pH, образованного в капилляре. Итак, в этом ключевое различие между хроматофокусировкой и изоэлектрической фокусировкой.
Другое различие между хроматофокусировкой и изоэлектрической фокусировкой заключается в том, что при хроматофокусировке не используется электрическое поле, в то время как для изоэлектрической фокусировки требуется электрическое поле.
Резюме – Сравнение хроматофокусировки и изоэлектрической фокусировки
Хроматофокусировка и изоэлектрическая фокусировка - это два похожих метода, которые обладают высокой разрешающей способностью молекул, особенно очень похожих молекул. Хроматофокусирование - это метод колоночной хроматографии с высоким разрешением, а изоэлектрическое фокусирование - это метод электрофореза. Хроматофокусировка не требует электрического поля, в отличие от изоэлектрической фокусировки. Таким образом, это суммирует разницу между хроматофокусировкой и изоэлектрической фокусировкой.
