Трансформация против трансфекции
Трансформация и трансфекция - это два простых метода, используемых для введения чужеродного гена в клетку-хозяина. Однако эти методы зависят от типа хоста или векторных систем.
Что такое клеточная трансформация?
Трансформация – это метод, используемый для введения генов в дрожжевые и бактериальные клетки. Этот метод обычно вызывает наследуемые изменения в генах, и поэтому экспрессия гена является постоянной. Бактериальная трансформация была впервые введена в 1928 году Фредериком Гриффитом. Затем в начале 1970-х этот прием был использован в работе Э.коли. В процессе трансформации E. coli клетки замачивают в ледяном растворе CaCl2. Этот этап делает клетки E.coli компетентными. После этого компетентные клетки смешивают с плазмидной ДНК и инкубируют на льду в течение 20-30 мин. Затем дается короткий тепловой шок, чтобы обеспечить перенос ДНК в клетку. Наконец, клетки помещают в питательный бульон и инкубируют при 37°С в течение 60-90 мин для установления плазмид. Как только эти этапы успешно завершены, трансформированные клетки можно поместить на подходящую среду для размножения клеток. Поскольку трансформация считается неэффективным методом, ее нельзя использовать для подготовки банков клонов.
Что такое трансфекция клеток?
Трансфекция – метод введения чужеродного гена, как правило, в клетки млекопитающих. Есть два метода трансфекции; а именно, транзиторная трансфекция и стабильная трансфекция. При транзиторной трансфекции экспрессия генов доступна в течение ограниченного времени; таким образом, изменение гена вызывает временную экспрессию. Этот метод трансфекции прост и быстр; следовательно, его можно использовать регулярно. Одним из недостатков транзиторной трансфекции является сложность применения в системах крупномасштабного синтеза белка.
Во время стабильной трансфекции ген-мишень интегрируется в геном клетки-хозяина, и, таким образом, экспрессия гена является постоянной, в отличие от транзиторной трансфекции.
В чем разница между трансформацией и трансфекцией?
• Трансформация – это введение гена в прокариотическую клетку (бактериальную и дрожжевую), тогда как трансфекцией обычно называют введение гена в клетку млекопитающего.
• Трансформация приводит к наследственным изменениям в генах, тогда как трансфекция может приводить либо к временной экспрессии, либо к постоянным изменениям в генах.
