Ключевая разница - YAC против M13 Phage Vector
Клонирование ДНК является важным процессом, который позволяет воспроизводить важные фрагменты ДНК организмов. Требуется соединение определенной ДНК с векторной ДНК для создания рекомбинантной ДНК, которая трансформируется в организм-хозяин. Вектор представляет собой молекулу ДНК, которая ведет себя как средство переноса чужеродного генетического материала в другую клетку или организм. Он должен быть способен реплицироваться внутри организма-хозяина и производить множество копий рекомбинантной ДНК. Существуют различные виды векторов, используемых при клонировании ДНК. Среди них два типа - искусственная хромосома дрожжей (YAC) и фаговый вектор M13. Ключевое различие между YAC и фаговым вектором M13 заключается в том, что YAC представляет собой искусственную хромосому, которая реплицируется в дрожжевых клетках, тогда как фаговый вектор M13 представляет собой одноцепочечную кольцевую ДНК бактериофага M13, которая реплицируется в клетках кишечной палочки.
Что такое вектор YAC?
YAC - это искусственно созданная хромосома, способная нести большой сегмент чужеродной ДНК и реплицироваться в дрожжевых клетках. Он имеет центромерную, теломерную и автономно реплицирующиеся последовательности, необходимые для репликации и стабильности. YAC также должен нести селективный маркер или маркеры и сайты рестрикции, чтобы сделать его эффективным клонирующим вектором. Большие последовательности размером от 1000 до 2000 т.п.н. могут быть вставлены в YAC и перенесены в дрожжи.
Рисунок 01: Вектор YAC
Что такое фаговый вектор M13?
Бактериофаг M13 - это вирус, который инфицирует кишечную палочку и размножается в ней. Геном бактериофага М13 имеет небольшие размеры, около 6,7 т.п.н. Это одноцепочечная кольцевая ДНК с положительным смыслом. Этот вирус специфически заражает бактерии кишечной палочки через F пилус. Как только он входит в состав оцДНК бактерии, он синтезирует свою комплементарную цепь и становится двухцепочечной ДНК или репликативной формой (RF) M13. RF может вести себя как плазмида в организме хозяина. ДцДНК реплицируется в E Coli и производит одноцепочечную ДНК, несущую новые фаги. Эти новые фаги постоянно высвобождаются из кишечной палочки, не убивая клетку-хозяина. Однако инфекция замедляет рост кишечной палочки. дцДНК можно выделить из бактериальных клеток и использовать в качестве векторов при клонировании ДНК. Они известны как фаговые векторы М13. С ними можно легко манипулировать и использовать аналогично плазмидным векторам.
Присущая этим фагам М13 способность инфицировать служит хорошей квалификацией для использования в качестве вектора для клонирования генов. При превращении M13 в вектор в его геном должны быть включены несколько элементов. Это ген белка-репрессора lac (lac I), проксимальная операторная область гена lac Z, промотор lac и сайт множественного клонирования (полилинкер). Когда двухцепочечную ДНК M13 используют в качестве векторов, ее можно рассматривать как плазмидный вектор. Однако использование одноцепочечной ДНК M13 имеет преимущества при секвенировании ДНК и сайт-направленном мутагенезе.
Поскольку фаговый вектор M13 имеет сайт множественного клонирования в области lacZ, рекомбинированные векторы можно легко идентифицировать с помощью скрининга колоний синего/белого цвета на чашках с агаром, содержащих IPTG и X-Gal. Синие бляшки, образующиеся на чашках, не содержат рекомбинированных фагов. Поэтому для целей клонирования можно выбирать фаги со вставками.
Рисунок 02: Бактериофаг M13
В чем разница между YAC и фаговым вектором M13?
YAC против M13 Phage Vector |
|
| YAC представляет собой генетически сконструированную хромосому, способную нести большой сегмент чужеродной ДНК и реплицироваться в дрожжевых клетках. | М13 фаговый вектор представляет собой вирусный вектор, разработанный бактериофагом М13, который используется для встраивания чужеродной ДНК в кишечную палочку. |
| Цель | |
| YAC были разработаны для клонирования больших фрагментов геномной ДНК в дрожжи. | Фаговые векторы M13 используются для встраивания чужеродной ДНК в кишечную палочку. |
| Длина вставки | |
| YAC могут содержать геномные вставки размером в мегабаза (1000–2000 кб). | Размер вставок около 1 500 бит/с. |
| Строительство | |
| ДНК YAC трудно очистить в неизменном виде, и для создания векторной системы YAC требуется высокая концентрация. | Это происходит посредством циклической фотосинтетической электронной цепи. |
| Стабильность | |
| YAC нестабилен. | Фаги M13 могут быть легко извлечены. |
| Размер | |
| Ферменты – это более крупные молекулы. | Фаги M13 стабильнее, чем YAC. |
Резюме – YAC против M13 Phage Vector
YAC - это искусственно сконструированная векторная система, использующая определенный участок дрожжевой хромосомы для встраивания больших сегментов генетического материала в дрожжевые клетки. Фаговый вектор М13 представляет собой векторную систему, полученную из бактериофага М13, который использует кишечную палочку в качестве организма-хозяина. В этом основное различие между YAC и фаговым вектором M13. Оба одинаково полезны в технологии рекомбинантной ДНК и клонировании генов.
