Ключевая разница - трансформанты против рекомбинантов
Рекомбинация и трансформация - два важнейших шага в генной инженерии, когда характеристики организма преднамеренно изменяются путем манипулирования его генетическим материалом. Рекомбинация - это процесс, при котором чужеродная ДНК встраивается в геном вектора и образуется рекомбинантная молекула ДНК. Трансформация является следующим этапом, на котором рекомбинантная молекула вводится в организм хозяина. Клетка-хозяин или организм способствует экспрессии рекомбинантной молекулы. Ключевое различие между трансформантами и рекомбинантами заключается в том, что трансформанты представляют собой клетки или организмы, которые принимают рекомбинантную молекулу внутрь и облегчают экспрессию, в то время как рекомбинанты представляют собой векторы, которые позволяют встраивать чужеродную ДНК в ее геном и транспортировать в трансформанты-хозяева для экспрессии.
Что такое Трансформанты?
Трансформанты – это клетки или организмы, в которых рекомбинантная ДНК используется для экспрессии. Бактерии обычно используются в качестве организмов-хозяев в генной инженерии, поскольку их легко выращивать, размножать и обрабатывать в лабораторных условиях, а процесс трансформации прост по сравнению с другими организмами. Наиболее популярной бактерией-хозяином, используемой в генной инженерии, является бактерия E coli.
Во время процесса трансформации клетки-хозяева вынуждены поглощать рекомбинанты. Однако некоторые клетки-хозяева не поглощают рекомбинантные молекулы. Они известны как нетрансформанты, а клетки, содержащие внутри молекулы рекомбинантной ДНК, известны как трансформанты. Селекцию трансформантов из нетрансформантов проводят с использованием селектируемых маркеров в молекулярной биологии. Селектируемые маркеры встраиваются в геном вектора вместе со вставкой ДНК. Обычно используемые селектируемые маркеры представляют собой гены устойчивости к антибиотикам. Маркерные гены облегчают дифференцировку трансформантов и продолжают процесс. После процесса трансформации бактерию выращивают в среде, содержащей антибиотик. Только трансформанты способны расти на этой среде, поскольку они содержат рекомбинанты внутри.
После трансформации молекулы рекомбинантной ДНК внутри организма-хозяина чужеродная ДНК может либо интегрироваться в геном клетки-хозяина, либо оставаться неинтегрированной в цитоплазме. Однако экспрессия и репликация чужеродной ДНК происходят в организме хозяина и приводят к желаемому результату процесса.
Что такое рекомбинанты?
Рекомбинант – это организм или клетка, обладающая рекомбинантным геномом, содержащим чужеродную ДНК. Рекомбинанты являются результатом процесса генной инженерии. Их искусственно конструируют in vitro, вставляя интересующие гены и модифицируя геном. Часто в качестве рекомбинантов в генной инженерии выступают бактериальные плазмиды и бактериофаги. У него есть химеры разных ДНК. Молекула рекомбинантной ДНК переносит чужеродную ДНК в организм хозяина и заставляет ее экспрессироваться и образовывать желаемый продукт.
Рекомбинантные молекулы конструируют с использованием эндонуклеаз рестрикции и ДНК-лигаз. Желаемый фрагмент ДНК отделяют от исходного организма и встраивают в вектор, чтобы получить рекомбинант для трансформации. Вырезание интересующего гена и вскрытие организма-вектора следует проводить с использованием одного и того же фермента рестрикции, чтобы создать совместимые липкие концы для их соединения. Когда чужеродная ДНК включается в геном вектора, она называется рекомбинантной или рекомбинантной молекулой ДНК.
Рисунок 02: Рекомбинантная ДНК
В чем разница между трансформантами и рекомбинантами?
Трансформанты против рекомбинантов |
|
| Трансформанты – это клетки, внутри которых находится рекомбинантная молекула ДНК. | Рекомбинанты – это молекулы-носители, в которых чужеродная ДНК встроена в собственный геном. |
| Экспрессия чужеродной ДНК | |
| Это клетки-хозяева, способные экспрессировать рекомбинантную ДНК. | Они должны иметь возможность самовоспроизводиться в организме-хозяине. |
| Подборка | |
| Клетки, которые можно легко выращивать и размножать, выбирают в качестве клеток-хозяев. | Они должны легко извлекаться и содержать выбираемые маркеры. |
Резюме – Трансформанты против рекомбинантов
Трансформанты – это клетки или организмы с молекулами рекомбинантной ДНК внутри них. Рекомбинанты - это организмы или клетки, подвергшиеся генетической рекомбинации и имеющие в своем геноме чужеродную ДНК. Бактериальные клетки часто используются в качестве клеток-хозяев для трансформации, а плазмиды и бактериофаги часто используются в качестве векторов в технологии рекомбинантной ДНК. В этом разница между трансформантами и рекомбинантами.
