Ключевое различие между одногибридными дрожжами и двухгибридными дрожжами заключается в том, что одногибридные дрожжи представляют собой анализ на основе анализа ДНК-белковых взаимодействий in vitro, в то время как двухгибридные дрожжи представляют собой анализ на основе анализа белок-белковых взаимодействий in vitro.
Изучение взаимодействий между клеточными молекулами может помочь определить сайты узнавания, участвующие в экспрессии генов и белковых путях. Взаимодействия ДНК и белков являются неотъемлемой частью клеточных процессов, таких как модификации ДНК и регуляция транскрипции и т. д. С другой стороны, взаимодействия белков и белков играют жизненно важную роль в клеточных процессах, таких как репликация, транскрипция, трансляция и передача сигнала. Поэтому крайне важно идентифицировать эти взаимодействия клеточных молекул с помощью различных анализов. Дрожжи с одним гибридом и дрожжи с двумя гибридами - это два метода анализа in vitro для анализа взаимодействий ДНК-белок и белок-белок.
Что такое Yeast One Hybrid?
Дрожжевой гибрид (Y1H) представляет собой анализ in vitro для анализа внутриклеточных ДНК-белковых взаимодействий. Этот метод был впервые разработан Вангом и Ридом в 1993 году. С тех пор он показал большую эффективность в биологических исследованиях. В этом тесте есть два основных компонента: ДНК-приманка и белковая добыча.
Рисунок 01: Yeast One Hybrid
В этой процедуре последовательность ДНК (приманка ДНК) сначала клонируется перед двумя разными репортерами (HIS3, LacZ). Эти репортерные конструкции интегрированы в геном штамма дрожжей. Факторы транскрипции рассматриваются как добыча белка. Факторы транскрипции сливаются с доменом активации транскрипции (AD) дрожжевого транскрипционного фактора Gal4 для получения гибридных белков. Весь этот гибридный белок интегрируется в плазмиду перед введением его в штамм дрожжей. После введения рекомбинантной плазмиды, когда транскрипционный фактор взаимодействует с фрагментом ДНК, фрагмент AD активирует экспрессию репортерного гена (HIS3 или LacZ). Секвенирование плазмид позволяет идентифицировать фактор транскрипции, который может связываться с фрагментом ДНК. Недавно дрожжевой одногибридный метод был использован для исследования диагностики заболеваний. Поэтому в будущем этот анализ будет более широко использоваться в научных исследованиях и лечении.
Что такое Yeast Two Hybrid?
Два гибрида дрожжей (Y2H) представляет собой анализ in vitro для анализа внутриклеточного белка и белковых взаимодействий. Этот метод был первоначально открыт Стэнли Филдсом и Ок-Кью Сонгом в 1989 году. Этот метод обнаруживает белок-белковые взаимодействия с использованием транскрипционного фактора Gal4 дрожжей.
Рисунок 02: Дрожжевой гибрид
В этом методе сначала конструируют два слияния (гибрида) с использованием представляющих интерес белков: слияние одного белка с ДНК-связывающим доменом (DBD) и слияние другого белка с доменом активатора (AD) фактора транскрипции Gal4.. Белок, слитый с DBD, известен как приманка, а белок, слитый с AD, известен как добыча. В штамме дрожжей при взаимодействии приманки и жертвы DBD и AD оказываются в непосредственной близости, чтобы генерировать функциональный фактор транскрипции Gal4 выше репортерного гена. Функциональный фактор транскрипции активирует экспрессию репортерного гена. Кроме того, этот метод в настоящее время используется для скрининга взаимодействий интегральных мембранных белков в клетках млекопитающих.
В чем сходство между гибридом Yeast One и гибридом Yeast Two?
- Дрожжи с одним гибридом и дрожжи с двумя гибридами - это два метода анализа in vitro для анализа взаимодействий ДНК и белка и белок-белок.
- В этих анализах используются штаммы дрожжей.
- В обоих тестах используется домен активации (AD) транскрипционного фактора Gal4.
- Они используют экспрессию репортерного гена (HIS3 или LacZ) для обнаружения взаимодействий.
- У них есть наживка и добыча.
- Оба метода очень полезны в современных биологических исследованиях.
В чем разница между Yeast One Hybrid и Yeast Two Hybrid?
Дрожжи один гибрид представляет собой анализ на основе in vitro для анализа ДНК и белковых взаимодействий, в то время как дрожжи два гибрида представляют собой анализ на основе in vitro для анализа белковых и белковых взаимодействий. Таким образом, это ключевое различие между дрожжами с одним гибридом и дрожжами с двумя гибридами. Кроме того, у дрожжевого гибрида приманкой является фрагмент ДНК, а добычей - молекула белка. С другой стороны, у дрожжей два гибрида, как приманка, так и добыча, представляют собой белковые молекулы.
В приведенной ниже инфографике перечислены различия между дрожжевым гибридом one и дрожжевым гибридом two в табличной форме для параллельного сравнения.
Резюме – Yeast One Hybrid против Yeast Two Hybrid
Дрожжи один гибрид и дрожжи два гибрида являются двумя важными анализами на основе in vitro. Гибрид дрожжей один представляет собой анализ на основе in vitro для анализа взаимодействий ДНК и белка, в то время как гибрид дрожжей два представляет собой анализ на основе анализа взаимодействия белка и белка in vitro. Таким образом, это ключевое различие между одногибридными дрожжами и двухгибридными дрожжами.
